Стерилизация банок закатанных: Как стерилизовать банки пустые и с заготовками

Как стерилизовать банки пустые и с заготовками

Для сохранности домашних заготовок и салатов на зиму необходимо, чтобы банки были идеально чистыми, а этого можно добиться лишь стерилизацией. Перед тем, как стерилизовать банки, внимательно осмотрите их — с неоттираемыми пятнами, сколами или трещинками — выбрасываем, такие банки для заготовок не пригодны.

Как стерилизовать банки на пару

Сейчас мало кто пользуется обычными чайниками, которые ставятся на плиту, а на них ведь очень удобно стерилизовать банки. Одеваете банку голышком на носик чайника, даете покипеть 15 минут. В хорошо прогретой банке капли пара перестают образовываться, теперь ее можно снять и одеть следующую. Процедура безопасна, поскольку пар нагревает банку не выше 100 градусов цельсия.

Вместо чайника можно использовать и кастрюлю, накрытую сеткой (например, рассекателем для брызг при жарке), но большая часть пара будет уходить в воздух и добиться хорошего прогревания банок не получится, да и на кухне будет слишком влажно.

Так же можно стерилизовать небольшие банки и крышки в пароварке.

Стерилизация кипячением

Можно и прокипятить банки в воде в течение 15 минут. Недостаток, помимо парилки на кухне, — внутри банок оседают соли жесткости из воды, которые вы будете потом кушать вместе с содержимым баночки. Да и вытаскивать банки из кипятка — не такое уж легкое и  приятное занятие.

Как стерилизовать банки в микроволновке

В банку налить 1 см воды и поставить в СВЧ мощностью 700-800 ватт на 2−3 минуты — вода закипает, а банки стерилизуются паром, если банок много — время нужно увеличить. Если банка большая, положите ее на бок. Не ставьте в микроволновку пустые банки. И крышки лучше стерилизовать просто в воде на плите.

Стерилизация в аэрогриле

Вымытые банки установить на нижнюю решетку аэрогриля. Поставить кольцо-увеличитель.

Как стерилизовать банки в духовке

Промытые банки поставить в духовку на решетку (не ставьте на противень, могут полопаться) и включить ее на режим примерно 160°. Ставтье так, чтобы банки не касались друг друга. Нагревать, пока капли полностью не высохнут, 5-10 минут. Не перегрейте, не повышайте температуру в духовке. После стерилизации не вытаскивайте банки из духовки сразу же, дайте остыть до 80 — 90 градусов. Крышки в духовке стерилизовать нельзя.

Лично я предпочитаю этот метод стерилизации, поскольку банок в духовку влазит много и особой возни с ними при этом нет.

Стерилизованные любым способом банки выставляют на сухое полотенце или ткань, закладывают в них домашние заготовки — огурцы, помидоры, салаты, варенье и прочие вкусности, закрывают стерилизованными крышками.

Как стерилизовать крышки.

Перед стерилизацией проверьте целостность крышки, отсутствие ржавчины, наличие резинок (при необходимости). Самый простой и доступный способ продезинфецировать крышки — кипятить их 10-15 минут. Вытаскивайте крышки из воды прокипячеными щипцами.

Как стерилизовать заготовки

Часто встает необходимость стерилизовать и готовый продукт. Обычно, в этом нуждаются: салаты (лечо, икра и так далее), все заготовки из овощей без уксуса, маринованные грибы, компоты, соки. Варенье, маринованные огурцы и помидоры в стерилизации не нуждаются (стерилизуются только пустые банки для них).

Процесс: Банки с заготовками прикрывают прокипяченными крышками (не закатывать). Выставляют в кастрюлю с подогретой примерно до температуры банки водой так, чтобы вода покрывала плечики банки, но не доходила 1,5-2 см до горлышка.

Желательно на дно кастрюли положить деревянный кружок, чтобы банки не катались и не бились друг об друга. Кипятят необходимое время. Вытаскивают. Закатывают.

Обычно время стерилизации указывается в рецептах консервирования. Классический случай (для заготовок, которые закладываются в банку горячими): литровые банки стерилизовать 10-15 минут, двухлитровые — 20-25 минут, трехлитровые — 25-30 минут. Это время применимо для жидких салатов, помидоров и фруктов в собственном соку, лечо. Жареные салаты обычно стерилизуют немного дольше.

Иногда, например, когда нужно простерилизовать зеленый горошек, вода должна кипеть при температуре выше 100 градусов. Для этого в воду добавляется обычная соль. Нужна температура кипения 101 градус – добавьте 66 г соли на литр воды, 102 градуса – 126 г соли, 103 – 172, 104 – 215, 105 – 255, 107 – 355, 110 – 478.

Как пастеризовать банки с заготовками

Когда, наоборот, стерилизация проводится при температуре воды ниже 100 градусов, примерно 85 градусов — это называется пастеризация, нужно пользоваться термометром и время от времени выключать огонь, а время нахождения банок в кастрюле увеличивается в 2-3 раза. В пастеризации нуждаются компоты, овощные маринады.

Как правильно стерилизовать банки с заготовками: правила и методы

Занимаясь приготовлением маринованных и соленых продуктов на зиму, стремятся оградить их от порчи. Ведь часто труды пропадают даром, банки с огурцами, помидорами, компотами мутнеют и взрываются. Поэтому надо обращать внимание на то, как стерилизовать банки с заготовками правильно.

Можно ли стерилизовать банки с заготовками

Для длительного сохранения зимних заготовок необходима стерилизация. Означает этот термин нагревание до температуры кипения. Тогда происходит полное уничтожение патогенных микроорганизмов или подавление их активной деятельности. Зависит эффект стерилизации от того, какова кислотность продукта. Так, помидоры обладают повышенным содержанием кислоты, поэтому консервы с ними пастеризуют, не затрачивая много времени.

Салаты с кабачками придется доводить до температуры в 100 градусов и выше длительное время. Иначе в них может развиться бактерия ботулинус, которая высокотоксична для организма человека. А низкая кислотность кабачков не позволяет подавить действие бактерий.

Режим тепловой обработки заготовок зависит от консистенции зимней закуски. Жидкие продукты быстрее прогреваются. Объем тары также влияет на процедуру проведения обработки. Пол-литровые банки с икрой держат 10 минут, а 3-литровые заготовки до 30 минут.

Зачем это нужно

Цель стерилизации — предотвратить порчу овощной продукции, удлинить срок ее употребления в пищу. Используют способы пастеризации обязательно в отношении тех продуктов, которые имеют в составе жидкость. Ведь сушеные грибы не подвергаются этой процедуре, так как в них отсутствует среда для развития плесени. Не могут развиваться носители токсинов при низкой температуре. Помещенные в морозильник на зиму плоды сада и огорода не испортятся.

После действия высоких температур банки с овощами обязательно герметично закрывают, закатывая металлическими крышками.

Можно залить сверху слоем горячего животного жира, сливочного масла. Он не пропустит микробы внутрь емкости, поэтому сверху обвязывают горлышко банки пергаментной бумагой, тканью.

Не требуют пастеризации те консервы, которые закрывают полиэтиленовыми крышками.

Способы стерилизации

Перед началом приготовления овощей на зиму стоит выбрать способ стерилизации и подготовиться к нему. Процесс пройдет удачно, если:

• тара будет без трещин, сколов на горлышке;
• подберут качественные крышки;
• промоют банки водой с пищевой содой или сухой горчицей перед закладкой салата.

Существуют определенные правила у каждого способа, которые нарушать нельзя. Если продержат банки с заготовками меньше положенного времени, то микроорганизмы начнут свою деятельность после остывания маринада, соуса.

В кипящей воде

Один из распространенных и простых методов требует маленьких затрат сил и времени. Его проводят, стерилизуя банки с заготовками в кастрюле с кипящей водой. Подбирают такую емкость, в которую войдет несколько банок с зимними салатами. Высота кастрюли должна быть такая, чтобы вода прикрывала стеклянную тару по плечики.

Проводят процедуру:

• положив на дно кастрюли подставку из дерева или металла либо кусок плотной ткани;
• выставив банки, прикрытые сверху крышками;
• наливая теплой воды;
• нагревая воду до кипения.

Оставлять следует после закипания воды на 10 минут для пол-литровых банок, 15 минут — литровых, 25-30 — 2 и 3-литровых.

Для некоторых продуктов нужна температура выше 100 градусов. Достичь этого следует добавлением в воду соли. Так 48%-й солевой раствор поможет закипеть воде при 110 градусах.

В духовке

Удобно проводить стерилизацию консервов с овощами в духовом шкафу. Там идет постепенное нагревание тары с заготовками.

Помещают банки с горячими салатами, икрой на решетку в теплую духовку. Выставляют температуру сначала в 100 градусов, затем увеличивая до 120.

Времени на процедуру отводится столько же, как и в кипящей воде. Чем больше по объему тара, тем дольше. Для лучшей сохранности консервации горячие заготовки вытаскивают и сразу же закатывают. Для остывания укутывают шерстяным одеялом.

В микроволновой печи

Этот способ применяют также часто. Но существует один нюанс: нельзя сверху на банки класть железные крышки. Это приведет к сбою в работе микроволновки. Можно ставить тару с содержимым открытой, а крышки отдельно продезинфицировать в кипятке.

Выставляют банки, полные овощной продукции, по всей площади печи. Включать надо на полную мощность, чтобы салаты внутри тары закипели. Их держат по времени от 10 до 15 минут, ведь большие по объему емкости не войдут в микроволновку. Прибор подходит для стерилизации небольших банок.

Проблемой может стать то, что содержимое будет выливаться из тары, если она наполнена до краев. Это надо учитывать при проведении стерилизации в СВЧ-печи.

Пастеризация

Отличие пастеризации от других способов состоит в том, что перед закаткой нагревают емкости с зимними заготовками до температуры в 98-99 градусов. Ведь кипящие продукты теряют полезные для организма витамины. Поэтому при пастеризации потеря витаминов минимальна, а цвет и вкус продукта не меняется. При этом после тепловой обработки овощи станут готовые к употреблению.

В условиях дома проводить надо пастеризацию на водяной бане. Понадобится для процесса бак или широкая кастрюля. Многие используют для пастеризации мантоварку. В кастрюлю нужно положить крышку с дырочками или несколько слоев полотна.

Выставляют наполненные овощными смесями банки так, чтобы они находились на расстоянии в 2-3 сантиметра друг от друга и металлических стенок бака.

Процедура пастеризации проходит быстро. Воду нагревают, измеряя температуру специальным градусником. Затем останавливают нагревание, поддерживая температуру в течение 10-25 минут в зависимости от объема тары.

После процедуры вынимают заготовки и укупоривают крышками. Затем надо банки покатать по столу, чтобы они быстрее остыли.

Когда обнаруживается дефект консервации, то можно продукт в емкости пастеризовать вторично. Но времени понадобится для обработки меньше на 5 минут.

Если дефект обнаружен быстро, то проводят обработку резиновой прокладки спиртом. А саму крышку дезинфицируют горящим спиртом. Затем быстро проводят закрутку, проверяя герметичность ее.

Советуют охлаждать пастеризованные консервы в кастрюле с горячей водой, подливая постепенно холодную. При таком способе ягоды, плоды не размякнут и сохранят свою целостность.

Можно ли стерилизовать уже закатанные банки

Стерилизовать и пастеризовать советуют в закрытом виде те банки, для укупорки которых используют стеклянные крышки с зажимами. Сначала устанавливают на горлышко уплотнитель из резины, сверху — крышку и зажимают специальным приспособлением. Перед закруткой следят, чтобы уплотнитель не сдвинулся. Можно применять 2 зажима, располагая их крест-накрест.

Если применяют для герметичности зимних консервов обычные металлические крышки с использованием закаточной машинки, то такие банки не закрывают перед стерилизацией. Проводят закатку после того, как продукт пастеризовали или стерилизовали.

Стерилизация банок с заготовками в кастрюле 

В осенний сезон, когда на огороде массово созревают овощи, бережливые хозяйки стремятся как можно качественнее их сохранить на зиму, приготавливая различные салаты, лечо и прочие закуски. Многие рецепты таких заготовок требуют осуществления дополнительной стерилизации уже после того, как банки были наполнены готовым продуктом. Чаще такую меру используют в том случае, если заготовка не содержит в себе большого количества консервантов – сахара, соли, уксуса, жгучего перца. Дополнительная стерилизация позволяет удалить абсолютно все микроорганизмы, которые так или иначе, могут попасть даже в чистую банку и вызвать брожение. Стерилизовать наполненные банки можно различными способами. Подробное описание каждого из них постараемся привести далее в статье.

Стерилизация в кипящей воде

Такой способ стерилизации наполненных банок является самым распространенным. Для его реализации не нужно использовать «диковинную» кухонную технику или специальные приспособления. Достаточно только воспользоваться газовой либо электрической плитой и найти кастрюлю необходимого размера: ее высота должна быть больше высоты банки.

Стерилизацию банок с заготовками в кастрюле нужно осуществлять следующим образом:

• На дно кастрюли положить деревянную, металлическую подставку или кусочек ткани.
• Наполненные банки поставить в емкость, поверх положить крышки.
• В кастрюлю налить теплую воду ниже горлышка банки на 1-2 см (до плечиков). Вода должна быть не холодной и не горячей, резкие перепады температуры могут привести к тому, что стеклянная тара лопнет.
• Кипятить воду нужно столько времени, чтобы равномерно прогреть весь объем содержимого банки. Время стерилизации может быть указано в рецепте. Если точных рекомендаций нет, то можно воспользоваться общими принципами стерилизации. Так, пол литровую банку следует кипятить 10 мин, емкости объемом 1 и 3 л кипятят соответственно 15 и 30 мин.
• После кипячения стерилизованные банки с зимними заготовками плотно закупорить крышками.

При стерилизации банок необходимо учитывать не только время кипячения, но и рекомендуемую температуру. Например, жареные салаты или горошек рекомендуется стерилизовать при температуре более 100⁰С. Такие условия можно создать в том случае, если воду в кастрюле подсолить. Так, 7% солевой раствор закипает только при 101⁰С, для получения 110

Благодаря своей простоте и высокой эффективности способ стерилизации наполненных банок в кипятке получил самое широкое распространение. Он позволяет быстро уничтожить вредоносную микрофлору внутри емкостей и сохранить продукты на долгое время.

Стерилизация в духовке

Получить высокую температуру для уничтожения вредоносных бактерий и грибков можно в духовом шкафу. Метод заключается в постепенном нагреве банок. Осуществлять стерилизацию в духовке можно следующим образом:

• Предварительно вымытые и наполненные готовым продуктом банки накрыть крышками (не плотно) и поставить на решетку либо противень.
• Нагревать духовку постепенно до необходимой температуры (от 100 до 120⁰С).
• Прогревать банки 10, 20 или 30 мин в зависимости от объема.
• Аккуратно вынуть банки из духовки, используя прихватки.
• Законсервировать приготовленный продукт.

Важно! Ставить банки в сильно разогретую духовку строго воспрещается.

Способ отлично подходит для стерилизации в том случае, когда необходимо получить высокую температуру более 100⁰С. Однако, используя его, необходимо регулярно следить за ростом температур в духовой камере. Все дело в том, что чрезмерно высокие показатели внутри духовки могут привести к повреждению стеклянной тары.

Стерилизовать наполненные банки можно в духовом шкафу газовой или электрической плиты. Выполнение этой процедуры отлично продемонстрирован на видео:

Комментарии опытной хозяйки и наглядный пример помогут каждому начинающему кулинару подготовить продукты для консервирования правильно.

Использование микроволновой печи

Наличие в доме СВЧ печи позволяет стерилизовать банки еще одним способом, который можно описать несколькими пунктами:

• Банки с заготовками расставить в микроволновке равномерно по всей ее площади.
• Включить СВЧ на максимальную мощность, довести продукт до кипения.
• Как только заготовки в стеклянных емкостях начинают кипеть, мощность необходимо немного  снизить и прогреть банки еще 2-3 мин.
• Горячие банки аккуратно достать из микроволновки и законсервировать.

К сожалению, использование микроволновки не решает вопрос стерилизации крышек для закатки зимних заготовок, поскольку металлические элементы внутри СВЧ приводят к ее поломке. Поэтому во время стерилизации банок необходимо дополнительно побеспокоиться об очистке крышек. Их в этом случае можно стерилизовать отдельно в емкости с кипящей водой.

Важно! В микроволновой печи не представляется возможной стерилизация трехлитровых банок. Они просто не поместятся во внутреннюю камеру кухонной техники.

Стерилизация или пастеризация

В силу своей неопытности многие начинающие хозяйки не понимают разницы между пастеризацией и стерилизацией банок. При этом некоторые рецепты советуют именно пастеризовать наполненные заготовками емкости. Отличия же между двумя процедурами необходимо четко понимать.

Пастеризация предполагает обработку тары и продуктов в ней температурным нагревом до 99⁰С. Высокая температура и отсутствие кипения позволяет уничтожить вредоносные бактерии и частично сохранить витамины в зимних заготовках. Пастеризовать банки можно в кастрюле на плите или в духовом шкафу. При этом время пастеризации необходимо увеличить вдвое в сравнении с обычной стерилизацией, а температуру снизить до 86-99⁰С.

Важно! Пастеризация чаще используется в тех случаях, когда сохранность продукта в большей мере обеспечивается натуральными консервантами.

Пастеризованные продукты рекомендуется хранить в прохладном и темном месте. В тепле оставшиеся после обработки споры бактерий могут активизировать свою деятельность и испортить заготовку.

Заключение

Стерилизовать зимние заготовки можно любым способом и сложно выделить из общего их числа лучший или худший вариант. Каждый способ имеет свои достоинства и недостатки, особенности. При этом результат термической обработки будет положительным только в том случае, если хозяйка учтет все важные моменты, выдержит необходимую температуру и продолжительность нагрева, рекомендуемую для качественной стерилизации имеющегося объема продуктов.

Как стерилизовать банки с заготовками в домашних условиях, пошаговая инструкция с видео

Стерилизация полных (наполненных) банок — это еще один способ для уничтожения микроорганизмов способсвующих быстрой порче консервируемых продуктов, также как и стерилизации пустых банок и крышек. Стерилизация полных банок это еще один способ сохранить домашние заготовки на зиму в целости и сохранности. И так, как правильно стерилизовать полные банки.

Для этого мы на дно широкой кастрюли положим кухонные полотенца или другую чистую материю сложенную в 5-6 слоев. Вместо ткани можно использовать специально сделанную деревянную решетку или круг.

Ставим сверху на ткань наполненные домашними заготовками банки.

Заливаем в кастрюлю теплую воду. Температура заливаемой воды должна быть не меньше температуры внутри самой банки, т.к. при большой разнице температур наши банки могут просто лопнуть. Воды нужно налить столько, чтобы она покрывала банки по «плечики».

Банки накрываем металлическим крышками, но не закручиваем.

Закрываем кастрюлю крышкой и даем закипеть.

После закипания убавляем огонь. Во время стерилизации нельзя допустить, чтобы вода бурно кипела т к при сильном кипении она может попасть внутрь наших банок.

После закипания кипятим домашние заготовки в зависимости от размера банки. Время стерилизации полных банок:

0,5 литровые — 10-15 минут;

1 литровые — 20-25 минут;

3 литровые — 30-35 минут.

Когда истечет время стерилизации — аккуратно вынимаем банку и закручиваем.

После закручивания обычно банки переворачиваю вверх дном и укутывают в тепло до полного их остывания.

Вот так нужно стерилизовать банки с заготовками на зиму (полные или наполненные) в домашних условиях.

Увидеть как происходит стерилизация полных банок можно на видео. Здесь, правда, больше уделено внимания стерилизации банок с металлическими зажимами, но на сам принцип стерилизации это не влияет.

Домашняя стерилизация банок. Как стерилизовать банки дома.

Здравствуйте, уважаемые читатели smashno.ru!

Хватит декларировать, что мужчины – лучшие в мире повара! Мужики, давайте на деле это доказывать! Неужто нам не по силе стерилизация банок?

Наступает сезон заготовок садово-огородной продукции на зиму. Давайте отличимся! Я вот хотел написать статью об этом для неопытных хозяек, а потом подумал: не женское это дело – с огнем, с паром, с кипящей водой. Поэтому, девчонки, пригласите-ка  к мониторам своих мужей! А то мы все  спецы по шашлычкам к празднику, а рутинную работу – на женщин.

Шаг 1: подготовим «взлетную» площадку: уберем со стола, с тумбочки все лишнее. Если кухня маленькая, можно использовать и подоконник. Покрываем все поверхности полотенцами в 2-3 слоя – сюда мы будем выставлять банки после стерилизации.

Шаг 2: моем банки. Много не рассуждаем – что да зачем: в банках не должно быть бактерий! Иначе не удастся зимой полакомиться помидорками-огурчиками. Если придется использовать какие-то моющие средства, банки надо ополаскивать тщательно, многократно. В зависимости оттого, как мы их стерилизовать будем, они могут быть влажными или  наоборот хорошо просушенными.

Шаг 3: стерилизуем банки. Способов стерилизации существует несколько, я вам опишу самый распространенный, потому как самый  верный и быстрый. Банки после мытья опрокиньте  на полотенчики. Когда вода стечет, свалите их на бок, чтобы там и частиц воды не осталось, иначе при стерилизации на стенках останутся  белесые разводы. Оно не вредно, но некрасиво!

Мне нравится банки в духовке прожаривать. Устанавливаю в холодную еще духовку, сколько уберется, но практика показала, что банки не должны друг друга касаться. Нам потребуется температура  в 120- 150 градусов и 15-20 минут. Затем духовку выключите – пусть все остынет.

Если вы делаете заготовки на даче, и у вас нет духовки, стерилизовать банки можно над паром. Банок мало — берете  старый чайник, горловина которого соответствует банке: она должна углубиться  в чайник до плечиков. Или можете накрыть кастрюлю фанеркой с отверстием  по размеру горлышка банки. Доводите воду до кипения, вставляете банку – и она стерилизуется паром минут 15-20.

А сейчас в продаже имеются и вот такие специальные крышки для кастрюль с отверстием под горлышко банки:

Если банок много —  разведите огонь на улице, на кирпичи установите  широкую кастрюлю (бак, ведро). Высота кастрюли должна быть такой, чтобы крышка закрывалась, когда туда банки поставите. Соорудите круглую решетку из реек (как на ванну кладут), кладете её на дно кастрюли, заливаете воду, чтобы она не покрывала решетку, ставите на неё чистые пустые банки, накрываете кастрюлю крышкой.

Огонь поддерживайте так, чтобы вода постоянно кипела, пар и будет уничтожать бактерии в банках. Минут 15 этот процесс займет, а вы  пока  овощи-фрукты помойте.

Вот, к примеру, для стерилизации полулитровых баночек я беру такую самую простую решетку

Кладу ее в глубокую кастрюлю, наливаю воду, чтобы она не доставала до верха решетки, ставлю на огонь. Как только вода закипает — банки ставлю горлышком вниз, кастрюлю накрываю крышкой, и идет стерилизация банок паром полным ходом. Через 15 минут извлекаем банки полотенечком или рукавицей — они очень горячие.

Не рекомендую стерилизовать банки в микроволновке: доказано, что бактерии там выживают.

Крышки сначала промываете с моющим средством, а потом кипятите в  широком блюде – минут 5. Хорошо бы это делать в очищенной через фильтр воде, иначе накипь на  крышки насядет. В крайнем случае –  переложите их в дуршлаг внутренней стороной вверх и кипящей водой обдайте. В продаже встречаются полиэтиленовые крышки, которые на первый раз точно не хуже металлических укупоривают, и тогда без закаточной машинки обойдемся, дело пойдет быстрее.

Если  посуды настерилизовали с запасом, поставьте ее вверх дном на полотенца.

Ну, теперь вы знаете, как стерилизовать банки! Совершенствуйте процесс — мужики это любят —  но не за счет  технологии. Просто перекуры пореже устраивайте и после перекуров руки тщательно мойте.

Шаг 5: важный очень —  закладываем  продукцию в банки. Если это горячее  (лечо, варенье, салат), прямо кипящее – в сухую горячую банку, и быстренько закрыть пластмассовой крышкой или  металлической (на которой уже нет влаги!) и – закаточную машинку в руки. Самая   что ни на есть  мужская работа: гайки крутить – это мы любим и умеем! Только не переусердствуйте, а то резьбу сорвете и банка лопнет.

Начинайте со слабых движений: сделали оборот – уменьшайте зазор.  Когда вам покажется, что хватит,  попробуйте рукой как бы отделить крышку от банки: если качается или проворачивается  – продолжайте  закручивание. Опыт  придет на второй же банке! Готовую банку переворачиваем  вверх дном – так проверяем, не будет ли она подтекать, но имейте в виду, что  густое содержимое просочиться не так быстро.

С компотами тоже просто дело обстоит. Ягоды хорошо промываем холодной водой. Закладываем в теплые простерилизованные банки, заливаем кипящим сиропом  (он может быть и без сахара вовсе), стерилизуем и закрываем.  Заливать нужно осторожно, тонкой струйкой по центру горлышка. Яблоки и т.п.  советую  залить крутым кипятком, слить его  назад, в кастрюлю, процедуру повторить и только на третий раз добавить в него сахар и опять кипящим наполнить банки и закатать.

Как же проводится домашняя стерилизация консервов и для чего? Стерилизованная консервация долго хранится, при этом существенно не изменяются вкусовые качества продуктов, сохраняется привлекательный внешний вид, естественная окраска.

На дно глубокой кастрюли или ведра кладем деревянную решетку (она предохранит банки от боя при кипении). Наполненные и накрытые крышками (еще не закатанные!!!) банки ставим в кастрюлю и наполняем ее подогретой (от 30 до 70 градусов) водой. Чем горячее подготовленные с консервацией банки – тем выше температура воды.

Вода в кастрюле должна покрыть плечики банок, но не доходить до горлышка на 1,5-2 см. Кастрюля накрывается крышкой и ставится на сильный огонь (чтобы сократить время нагрева и нахождения в горячей воде консервов). Как только вода закипела, делаем огонь поменьше, чтобы не было сильного бурления. Время кипячения зависит от вида консервов и объема банок.

Иногда, например, когда нужно простерилизовать зеленый горошек, вода должна кипеть при температуре выше 100 градусов. Для этого в воду добавляется обычная соль. Нужна температура кипения 101 градус – добавьте 66 г соли на литр воды, 102 градуса – 126 г соли, 103 – 172, 104 – 215, 105 – 255, 107 – 355, 110 – 478.

Иногда же, наоборот, стерилизация (пастеризация) проводится при температуре воды 85 градусов (компоты, овощные маринады). В таком случае, нужно пользоваться термометром, а время нахождения банок в кастрюле увеличивается в 2-3 раза.

Ну вот, закончили стерилизацию консервов, осторожно рукавичкой (продаются специальные захваты) достаем по одной банке и быстро закатываем. Вверх дном! Укутать теплой одеждой или покрывалом до полного остывания (таким образом консервация дополнительно самопастеризуется)

А зимой будем баловать себя и гостей вкусными домашними заготовками. Можете зайти в рубрику «консервация», там много чего вкусного, выбирайте: и малина и огурчики и компоты. Приятного аппетита!

Всего вам хорошего и до новых встреч!

Стерилизация банок в аэрогриле

Можно ли стерилизовать банки в аэрогриле? Ответ на этот вопрос прост: не только можно, но и удобно, легко и быстро. Никакого горячего пара и риска обжечься, а также никакой необходимости постоянного присутствия при процессе.

Для хозяюшек не секрет, что именно от того, как подготовлена тара, часто зависит успех всего предприятия по заготовке запасов на зиму. Ведь обидно, потратив уйму сил, времени, а если это не выращено на собственном огороде, то и денег, увидеть результат своих усилий безнадежно испорченным. Но если на вашей кухне поселился аэрогриль, стерилизация банок отнимет у вас минимум сил и времени, а консервация всегда будет отменного качества.

Сегодня разберемся, как стерилизовать банки в аэрогриле перед началом консервирования и как стерилизовать банки в аэрогриле с заготовками . Я делала стерилизацию банок в аэрогриле хоттер, но в других грилях все делается точно также.

Как стерилизовать банки в аэрогриле пустые банки.

— Сначала, как всегда, банки нужно хорошенько вымыть в теплой воде. Лучше всего для мытья банок использовать обыкновенное хозяйственное мыло. 

— При стерилизации банок в аэрогриле, то их можно не сушить, а сразу после мытья, стряхнув воду, ставить в чашу аэрогриля. Если стерилизуете большие банки, необходимо установить расширительное кольцо. Дальше включаем температуру 80 градусов и высокую скорость вентилятора на 3-5 минут. Баночки обсохнут и прогреются, а значит гарантированно не лопнут при более высокой температуре.

— После увеличиваем температуру до 150 градусов и стерилизуем в аэрогриле пустые банки в течение 10-15 минут, в зависимости от объема и назначения. Для полулитровых и литровых достаточно 10 минут, а полуторалитровые, двухлитровые и трехлитровые баллоны держим в гриле 15 минут.

— Крышки обдаем кипятком, накрываем ими простерилизованные банки и запускаем аэрогриль еще на 5 минут. Теперь в нашем распоряжении стерильные банки и крышки. Можно наполнять их содержимым. 

Стерилизация банок в аэрогриле с продуктами.

— Когда закатываем варенье, повидло, томат, аджику и другие подобные консервы, то дополнительно стерилизовать заполненные банки не требуется. Просто заполняем простерилизованные банки кипящим содержимым, закрываем и переворачиваем до остывания. Другое дело, когда речь идет о таких капризных заготовках, как огурцы, маринованные помидоры, баклажанная икра.

— Если нужно простерилизовать банки с огурцами, помидорами и другими заготовками, то заполнив стерилизованные банки содержимым и залив горячим маринадом, ставим обратно в аэрогриль, прикрываем крышками и стерилизуем еще 15 минут при температуре 180 градусов (время на литровую банку). Двухлитровые и трехлитровые банки стоит подержать в аэрогриле 20-25 минут. Уксус в маринады добавляем перед тем, как закатать.

Вот, собственно, и все основные хитрости по стерилизации банок в аэрогриле. Удачи вам и богатых запасов на зиму!

Стерилизация банок и правильная закатка варенья на зиму

Варенье — самая популярная заготовка на зиму. Без труда приготовить варенье можно из различных ягод (смородина, малина, земляника, вишня, бруснима) и фруктов (сливы, яблоки, персики, абрикосы и даже апельсины).
Ягоды можно как сварить, так и просто перетереть с сахаром, сохранив их натуральный аромат и вкус. Домашние заготовки на зиму из фруктов — это только варенье, то есть плоды, подвергнутые обязательной тепловой обработке (варке или тушению).

Как закатать варенье на зиму?

Первый способ — герметичная закатка под жестяные крышки при помощи закаточной машинки. Храниться в таком виде домашние заготовки могут как в погребе, так и при комнатной температуре (правда, в дали от источников тепла).

Как стерилизовать и закатать банки:

1. Предварительно все банки должны быть тщательно вымыты с содой внутри и снаружи.

2. Следующий этап — стерилизация банок. Раньше хозяйки стерилизовали банки, надев их на носик кипящего чайника, а теперь процесс значительно убыстряется — банки стерилизуют в духовке на решетке (не на противне) при температуре сто градусов.

3. Жестяные крышки необходимо прокипятить в кастрюле под крышкой в течение 5 минут.

4. Когда банки просушатся в духовке, их заполняют горяичм вареньем по самое горлышко.

5. Затем накрывают крышкой и закатывают специальной машинкой для закатки. Важно правильно выбрать закаточную машинку.

6. Закатанные банки проверяют на предмет плотного прилегания крышки (чтобы не двигалась, ен крутилась) и переворачивают крышкой вниз, тепло укутывают. Оставляют закатанные банки остыть (ориентировочно на ночь).

Второй способ — укупоривание копроновыми крышками

Хранится варенье, заготовленное таким способом, только в холодильнике либо в очень холодном погребе.

1. Барки стерилизуют как в первом способе, а капроновые крышки опускают в кипяток и сразу выключают огонь.

2. Варенье заливают в банку на 2 см ниже уровня горлышка и засыпают 1,5-сантиметровым слоем сахара.

3. Плотно закрывают капроновыми крышками и ставят в холодильник для хранения на зиму.

Поделиться ссылкой:

Автор: Валерия Лучная

» Валерия Лучная опубликовала рецептов: 929

пакеты и рулоны для стерилизации | Стерилинг

Страна — Выберите -AfghanistanAlbaniaAlgeriaAmerican SamoaAndorraAngolaAnguillaAntarcticaAntigua & BarbudaArgentinaArmeniaArubaAscension IslandAustraliaAustriaAzerbaijanBahamasBahrainBangladeshBarbadosBelarusBelgiumBelizeBeninBermudaBhutanBoliviaBosnia & HerzegovinaBotswanaBouvet IslandBrazilBritish Индийский океан TerritoryBritish Virgin IslandsBruneiBulgariaBurkina FasoBurundiCambodiaCameroonCanadaCanary IslandsCape VerdeCaribbean NetherlandsCayman IslandsCentral African RepublicCeuta & MelillaChadChileChinaChristmas IslandClipperton IslandCocos (Килинг) IslandsColombiaComorosCongo — BrazzavilleCongo — KinshasaCook IslandsCosta RicaCroatiaCubaCuraçaoCyprusCzechiaCôte d’IvoireDenmarkDiego GarciaDjiboutiDominicaDominican RepublicEcuadorEgyptEl SalvadorEquatorial GuineaEritreaEstoniaEswatiniEthiopiaFalkland IslandsFaroe IslandsFijiFinlandFranceFrench GuianaFrench PolynesiaFrench Южный TerritoriesGabonGambiaGeorgiaGermanyGhanaGibraltarGreeceGreenlandGrenadaGuadeloupeGuamGuatemalaGuernseyGuineaGu INEA-BissauGuyanaHaitiHeard & McDonald IslandsHondurasHong Kong SAR ChinaHungaryIcelandIndiaIndonesiaIranIraqIrelandIsle из ManIsraelItalyJamaicaJapanJerseyJordanKazakhstanKenyaKiribatiKosovoKuwaitKyrgyzstanLaosLatviaLebanonLesothoLiberiaLibyaLiechtensteinLithuaniaLuxembourgMacao SAR ChinaMadagascarMalawiMalaysiaMaldivesMaliMaltaMarshall IslandsMartiniqueMauritaniaMauritiusMayotteMexicoMicronesiaMoldovaMonacoMongoliaMontenegroMontserratMoroccoMozambiqueMyanmar (Бирма) NamibiaNauruNepalNetherlandsNetherlands AntillesNew CaledoniaNew ZealandNicaraguaNigerNigeriaNiueNorfolk IslandNorthern Mariana IslandsNorth KoreaNorth MacedoniaNorwayOmanOutlying OceaniaPakistanPalauPalestinian TerritoriesPanamaPapua Новый GuineaParaguayPeruPhilippinesPitcairn IslandsPolandPortugalPuerto RicoQatarRomaniaRussiaRwandaRéunionSamoaSan MarinoSaudi ArabiaSenegalSerbiaSeychellesSierra LeoneSingaporeSint MaartenSlovakiaSloveniaSolomon IslandsSomaliaSouth AfricaSouth Грузия и Южная Сэндвич IslandsSouth KoreaSouth Судан, Испания, Шри-Ланка, St.BarthélemySt. Елена Китс и НевисСант. LuciaSt. MartinSt. Pierre & MiquelonSt. Винсент и ГренадиныСуданСуринамШпицберген и Ян-МайенШвецияШвейцарияСирияСан-Томе и ПринсипиТайваньТаджикистанТанзанияТаиландТимор-ЛештиТогоТокелауТонгаТринидад и ТобагоТурТуристан-да-КунаТунисКизияТур Внешние острова Виргинские островаУгандаУкраинаОбъединенные Арабские ЭмиратыВеликобританияСоединенные ШтатыУругвайУзбекистанВануатуВатиканВенесуэлаВьетнамУоллис и ФутунаЗападная СахараЙеменЗамбияЗимбабвеАландские острова

Когда вы отправите форму, наш специалист может связаться с вами по электронной почте или телефону в соответствии с нашей политикой конфиденциальности.

стерилизационных практик | Рекомендации по дезинфекции и стерилизации | Библиотека руководств | Инфекционный контроль

После очистки, сушки и проверки предметы, требующие стерилизации, должны быть завернуты или помещены в жесткие контейнеры и должны быть размещены в лотках / корзинах для инструментов в соответствии с инструкциями, предоставленными AAMI и другими профессиональными организациями ^{454, 811 -814, 819, 836, 962} . В этих рекомендациях говорится, что навесные инструменты следует открывать; элементы со съемными частями следует разбирать, если производитель устройства или исследователи не предоставят особые инструкции или данные испытаний об обратном ¹⁸¹ ; сложные инструменты должны быть подготовлены и стерилизованы в соответствии с инструкциями производителя устройства и данными испытаний; устройства с вогнутыми поверхностями следует располагать так, чтобы облегчить отвод воды; тяжелые предметы следует размещать так, чтобы не повредить хрупкие предметы; и вес набора инструментов должен основываться на конструкции и плотности инструментов и распределении массы металла ^{811, 962} .Хотя для хирургических наборов больше не существует установленного предела стерилизационного веса, масса тяжелых металлов является причиной влажных упаковок (т. Е. Влаги внутри корпуса и лотка после завершения цикла стерилизации) ⁹⁶³ . Другие параметры, которые могут повлиять на сушку, — это плотность упаковки и конструкция набора ⁹⁶⁴ .

Существует несколько способов поддержания стерильности хирургических инструментов, включая жесткие контейнеры, открывающиеся пакеты (например, самозаклеивающиеся или термосвариваемые пластиковые и бумажные пакеты), рулоны или катушки (т.е. комбинации трубок из бумаги и пластика, предназначенные для того, чтобы позволить пользователю отрезать и запечатывать концы, чтобы сформировать пакет) ⁴⁵⁴ и стерилизационные обертки (тканые и нетканые). В медицинских учреждениях могут использоваться все эти варианты упаковки. Упаковочный материал должен обеспечивать проникновение стерилизующего вещества, обеспечивать защиту от контактного загрязнения во время работы, обеспечивать эффективный барьер для проникновения микробов и поддерживать стерильность обрабатываемого предмета после стерилизации ⁹⁶⁵ .Идеальная стерилизационная обертка будет успешно решать проблемы барьерной эффективности, проницаемости (т.е. позволяет стерилизующему проникать), аэрации (например, позволяет ETO рассеиваться), простоты использования, драпируемости, гибкости, устойчивости к проколам, прочности на разрыв, токсичности, запаха, удаления отходов , линтинг, стоимость, прозрачность ⁹⁶⁶ . Неприемлемая упаковка для использования с ETO (например, фольга, поливинилхлорид и поливинилиденхлор [прозрачная пленка кухонного типа]) ⁸¹⁴ или плазма газа пероксида водорода (напр.g., белье и бумагу) не следует использовать для упаковки медицинских изделий.

При централизованной обработке двойная упаковка может выполняться последовательно или непоследовательно (т. Е. Одновременная упаковка). Обертывание должно производиться таким образом, чтобы не допускать скатывания и образования щелей. В последовательном обертывании используются два листа стандартной стерилизационной обертки, один за другим оборачиваемый. Эта процедура создает пакет внутри пакета. Непоследовательный процесс использует два листа, обернутых одновременно, поэтому обертывание необходимо выполнить только один раз.Этот последний метод обеспечивает многослойную защиту хирургических инструментов от загрязнения и экономит время, поскольку упаковка выполняется только один раз. Многослойность по-прежнему является обычной практикой из-за суровости обращения на предприятии, даже несмотря на то, что барьерная эффективность одного листа обертки за годы улучшилась ⁹⁶⁶ . Письменные и иллюстрированные процедуры подготовки предметов к упаковке должны быть легко доступны и использоваться персоналом при выполнении процедур упаковки ⁴⁵⁴ .

6 Правил использования жестких стерилизационных контейнеров — Инфекционный контроль

При правильном использовании жесткие стерилизационные контейнеры обеспечивают более высокий уровень защиты от загрязнения инструментов, чем синяя обертка и лента. Звучит как базовая концепция, но я видел множество потрепанных и грязных контейнеров, используемых на уважаемых предприятиях по всей стране.Поэтому, когда дело доходит до подготовки жестких стерилизационных контейнеров к использованию, эти 6 методов должны строго соблюдаться.

1. Тестирование и повторное тестирование
Работа начинается еще до того, как вы выберете марку контейнеров для использования на вашем предприятии. Ключевой вопрос: совместим ли марка, которую вы рассматриваете, с вашим стерилизационным оборудованием? Некоторые контейнеры предназначены, например, только для стерилизации паром. Когда вы сузили кругозор, попросите продавцов прислать образцы своих моделей. Производители проверит эти образцы, но вы захотите убедиться, что каждое устройство допустимо для использования, путем собственного тестирования продукта.

Вы хотите создать сложный сценарий, чтобы увидеть, какие контейнеры подходят для наиболее эффективной стерилизации. Вот как. Поместите биологические индикаторы и химические индикаторы класса 5 в каждый контейнер, который вы хотите проверить. Попросите производителя определить, какие части их контейнеров наиболее устойчивы к стерилизации, и разместите индикаторы в этих местах (обычно в углах). Отметьте каждый индикатор в зависимости от того, где он находится в контейнере (например, «UL» для верхнего левого угла и «LR» для нижнего правого угла).Затем загрузите каждый контейнер в стерилизатор в наиболее трудном месте, например, над сливом стерилизатора. Обязательно пометьте каждый образец контейнера как тестовый, чтобы убедиться, что он никогда не попадет в операционную. После того, как вы выбрали бренд и совершили покупку, вы захотите продолжать это тестирование ежегодно, чтобы убедиться, что контейнеры остаются валидированными для использования.

2.Очистите правильно
Некоторые сотрудники ошибочно полагают, что контейнеры, которые доставлены в операционную и вынуты до прибытия пациента, можно использовать снова без очистки. Жесткие емкости необходимо мыть перед каждым использованием без исключений. Не менее важно мыть контейнеры в соответствии с инструкциями по применению их производителя. Я видел, как сотрудники протирают контейнеры салфетками с отбеливателем, даже если в инструкциях не указано, что их можно использовать. Также важно ознакомиться с инструкциями производителя по разборке.Например, перед очисткой необходимо вынуть фильтрующие пластины из контейнеров.

В инструкции по применению также указано, следует ли мыть емкости вручную или механически или использовать оба метода. После ручной стирки тщательно промойте моющее средство из емкости, так как остатки моющего средства могут отрицательно повлиять на емкость. Также обязательно используйте моющее средство, указанное в инструкции по применению контейнера. Например, многие емкости нельзя подвергать воздействию щелочных чистящих средств. Также обязательно используйте безворсовую ткань или ткань с низким ворсом при ручной чистке.

Если вы выбрали механическую мойку, убедитесь, что емкости правильно загружены в автоматическую стиральную машину. Думайте об этих машинах, как о домашней посудомоечной машине; если вы перегрузите его, если между предметами не будет достаточно места, моющий раствор не сможет получить доступ ко всем поверхностям. Насколько близко находится слишком близко при размещении контейнеров? Это во многом зависит от того, как расположены рычаги стиральной машины и как расположены ее стойки. Кроме того, ознакомьтесь с инструкциями по эксплуатации стиральной машины, поскольку некоторые устройства требуют размещения стерилизационных контейнеров на специальной стойке.

3. Соберите, как указано.
После очистки осторожно соберите наборы инструментов и поместите их в жесткие контейнеры для стерилизации. Опять же, проконсультируйтесь с инструкциями по использованию контейнера, чтобы узнать, какие элементы проверены для используемых вами контейнеров. Например, некоторые контейнеры не подходят для инструментов с просветом, а другие не могут работать с абсорбирующими материалами, такими как полотенца. Кредитные инструменты могут быть помещены только в контейнеры, допущенные для этого использования. Пакеты с кожурой для отдельных инструментов никогда не следует класть внутрь контейнера.Кроме того, запрещается размещать какие-либо предметы за пределами утвержденной производителем стойки или корзины для инструментов.

Если вы используете стойки для удержания инструментов с кольцами на месте, убедитесь, что они прошли валидацию для стерилизационного контейнера. Кроме того, переверните контейнер вверх дном, чтобы убедиться, что эти держатели установлены правильно и надежно удерживаются на месте.

Ассоциация по развитию медицинского оборудования (AAMI) и AORN предписывают, что собранные контейнеры для стерилизации паром должны весить не более 25 фунтов.Это руководство больше касается защиты стерильного технологического персонала, которому приходится поднимать контейнеры, чем предотвращения загрязнения оборудования.

Обратите внимание на плотность инструментов и предметов, которые вы кладете в контейнер. Представьте 25 фунтов хирургических инструментов, разложенных на подносе в кафетерии. А теперь представьте такое же количество инструментов, зажатых в коробке из-под обуви. Поскольку в обувной коробке меньше площади поверхности, инструмент будет плотнее и, следовательно, его будет труднее стерилизовать.Поскольку AAMI просто заявляет, что плотность должна быть «равномерно распределена», вы должны полагаться на свой собственный опыт для определения того, как вы должны размещать предметы в контейнерах. При использовании стерилизационных контейнеров для низкотемпературной стерилизации важно проверять инструкции как для стерилизатора, так и для контейнера на предмет ограничений по загрузке или весу.

4. Внимательно осмотрите.
Проверяйте контейнеры перед каждым циклом стерилизации, чтобы убедиться в отсутствии зазубрин, трещин или деформаций.Хотя вмятины иногда не замечают, они ставят под угрозу стерильность инструментов не меньше, чем разрыв на синей обертке. Нет, не имеет значения, сможете ли вы закрыть крышку. Также важно убедиться, что прокладки контейнера все еще податливы, и это верно независимо от того, предназначены ли прокладки для регулярной замены или на них действует пожизненная гарантия. Даже слегка поцарапанная или загрязненная прокладка может повлиять на герметичность емкости. Также убедитесь, что ваш удерживающий фильтр механизм по-прежнему находится в хорошем рабочем состоянии.Обеспечивает ли он хорошее прилегание к фильтру, и все ли заклепки и застежки все еще туго затянуты? Ручки все еще надежно прикреплены? Важно выявить проблемы с целостностью контейнера, прежде чем подвергать его какой-либо стерилизации.

5. Обращаться осторожно.
Поместите контейнеры в стерилизаторы плашмя и никогда не ставьте их друг на друга — между каждым контейнером должна проходить рука.И никогда не кладите их над завернутыми предметами с одной и той же загрузкой, так как с оборудования может капать конденсат. Проконсультируйтесь с инструкциями производителя автоклава по использованию для получения информации о максимальном весе на загрузку.

Перед тем, как выгрузить жесткие контейнеры из стерилизаторов, убедитесь, что они достигли комнатной температуры. Некоторые предприятия теперь полагаются на инфракрасные тестеры для определения точной температуры поверхности обогреваемых контейнеров. Если во время извлечения контейнеры совсем влажные, что может быть результатом плохого качества пара или неисправности стерилизатора, вам следует отказаться от цикла.

6. Хранение и транспортировка
Храните жесткие контейнеры в стерильных условиях на высоте 8–20 дюймов от пола и не менее 18 дюймов под любой спринклерной головкой. Разместите тару на полках для хранения; нижняя полка должна быть цельной. Вы можете сложить их друг на друга, но не кладите больше пары друг на друга. Во время транспортировки поместите контейнеры на закрытую тележку, чтобы защитить их целостность, и сотрудник, выполняющий транспортировку, должен двигаться осторожно, чтобы содержимое тележки не перевернулось.По прибытии в операционную, член хирургической бригады должен проверить целостность контейнера, прежде чем его содержимое будет использовано. OSM

Асептическая обработка и упаковка для пищевой промышленности

Обновлено: 14.07.2005

РУКОВОДСТВО

¹ Этот документ является справочными материалами для исследователей и другого персонала FDA.Этот документ не связывает FDA и не предоставляет никаких прав, привилегий, льгот или иммунитетов любому лицу (лицам).

Этот документ также доступен на

Формат PDF (1,144 КБ)

ВВЕДЕНИЕ

ПРОВЕРКА

Схема технологического процесса

Запланированный процесс

ОБРАБОТКА

Продукция Системы обогрева

ОБОРУДОВАНИЕ И ОРГАНЫ УПРАВЛЕНИЯ

Сырье и составы

Дозирующий или дозирующий насос

Стерилизатор

ЭКСПЛУАТАЦИЯ

Ввод в эксплуатацию

Записи

Отклонения от процесса

Очистка и повторная стерилизация после отклонения процесса

Запланированный процесс переработки продуктов

Системы стерилизации упаковки

СТЕРИЛИЗАЦИЯ, НАПОЛНЕНИЕ И ЗАКРЫТИЕ КОНТЕЙНЕРОВ

МЕТАЛЛИЧЕСКИЕ КОНТЕЙНЕРЫ И ЗАКРЫТИЯ

Оборудование и средства управления

Эксплуатация

Отклонения от процесса

КОНТЕЙНЕРЫ ИЗ КАРТОНА ИЛИ ПЛАЗИТА

Оборудование и средства управления

Эксплуатация

КОНАТИНЕРЫ С ТЕРМОФОРМОВЫМ УПЛОТНЕНИЕМ, ПРЕДВАРИТЕЛЬНОЙ СТЕРИЛИЗАЦИИ ТЕПЛОЙ ИЛИ СОЭКСТРУЗИЕЙ

Оборудование и средства управления

Обработка

Эксплуатация

Отклонения от процесса

МЕШОК В КОРОБКЕ СИСТЕМЫ УПАКОВКИ

Оборудование и средства управления

ЗАПИСИ

ОЦЕНКА ЗАКРЫТИЯ КОНТЕЙНЕРА

ОБРАБОТКА ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНЫХ ПРОЦЕССОВ

ОБУЧЕНИЕ

ТЕХНИЧЕСКОЕ ОБСЛУЖИВАНИЕ

СБОР ОБРАЗЦОВ

ТАБЛИЦА 1: ПРЕИМУЩЕСТВА И НЕДОСТАТКИ ОТОПИТЕЛЬНЫХ СИСТЕМ

ЦИФРЫ

Рисунок №1: Впрыск пара

Рисунок № 2: Паровая инфузия

Рисунок № 3: От продукта к продукту

Рисунок № 4: Трубчатый теплообменник

Рисунок № 5: Скребковый теплообменник

Рисунок № 6: Система металлических контейнеров для перегретого пара

Рисунок № 7: Картонная система Webfed I

Рисунок № 8: Система картона Webfed Paperboard II

Рисунок № 9: Система предварительно отформованных чашек……… стр. # 20

Рисунок № 10: Система термоформования-заполнения-уплотнения

Рисунок № 11: Асептическая система

Инспекции систем асептической обработки и упаковки консервированных пищевых продуктов с низким содержанием кислоты (LACF) являются одними из самых сложных инспекций при производстве пищевых продуктов. Основное различие между асептической обработкой и более «традиционными» типами обработки LACF заключается в том, что уполномоченный (ые) технологический орган (ы) должен разработать процесс, обеспечивающий коммерческую стерильность не только продукта, но и:

1. система стерилизации продукта (удерживающая трубка) и все оборудование, расположенное ниже по потоку от удерживающей трубки, включая наполнитель;
2. упаковочное оборудование; и
3. упаковочный материал.

Фирма должна вести документацию по производственным операциям, показывающую, что коммерчески стерильные условия достигаются и поддерживаются во всех этих областях. Любое нарушение запланированного процесса для системы обработки или упаковки означает, что затронутый продукт должен быть уничтожен, переработан или отделен и сохранен для дальнейшей оценки. Кроме того, перед возобновлением операций по переработке и / или упаковке необходимо очистить и повторно стерилизовать систему обработки и упаковки.

При стерилизации оборудования для асептической обработки часто используется пар или горячая вода под давлением. Упаковочное оборудование и упаковочные материалы стерилизуются различными средами или комбинациями сред (например, насыщенным паром, перегретым паром, перекисью водорода и нагреванием и другими видами обработки). Процедуры стерилизации часто подтверждаются размещением устойчивых микробных спор на липких полосках в стратегических местах оборудования или на материалах контейнеров. Результаты микробиологических проверочных исследований отправляются в CFSAN для подтверждения запланированной регистрации процесса.

В дополнение к инструкциям и информации, приведенным в Руководстве по проверкам производителей консервов с низким содержанием кислоты (Части 1, 2 и 3, далее именуемые Руководством по проверкам LACF), обратите внимание на следующие моменты при проверке фирм, использующих асептическую обработку и упаковка. Перед проведением проверки просмотрите оболочку файла компании на предмет предыдущих отчетов о проверке предприятия (EIR) и другой соответствующей информации. Предыдущие EIR могут содержать историю установки нового или модификаций оборудования и контрольно-измерительных приборов.Изучите предыдущую документацию, касающуюся инцидентов, таких как отзыв, проблемы целостности контейнеров (включая утечки, раздутые контейнеры и визуальные внешние дефекты).

Важно тщательно ознакомиться с каждым этапом процесса, прежде чем пытаться оценить систему на соответствие 21 CFR 108 и 113. Это включает в себя те компоненты, которые отвечают за управление критическими элементами в процессе.

В начале проверки получите схему или план всей системы обработки и упаковки и проведите пошаговый обзор системы, отметив различные компоненты на схеме. В некоторых случаях у фирмы может быть схема или план только части линии стерилизации продукта, то есть той части от резервуара для сырого продукта к разливочному устройству. Если диаграмма предназначена только для части линии, дополните ее своей собственной диаграммой (ами).

Если схема или чертеж недоступны, подготовьте блок-схему процесса — от поступления сырья до складского хранения готовой продукции.Критические контрольные точки — те точки, где отсутствие контроля может вызвать, допустить или способствовать микробиологической опасности в конечном продукте — должны быть обозначены на схеме технологического процесса.

Фирма должна иметь письменные инструкции по эксплуатации продукта и системы упаковки, включая процедуры предварительной стерилизации, чтобы довести стерилизатор продукта (удерживающая трубка) и оборудование ниже по потоку до наполнителя и упаковочной системы до коммерческой стерильности до начала стерилизации продукта. и / или упаковка.Получите копии этих процедур и отправьте вместе со схемой, планом или схемой процесса в EIR.

Если компания использует более одной системы асептической обработки, т. Е. Одну установку стерилизации продукта в сочетании с одним типом единицы упаковки (например, Dole, Tetra-Pak или Conofast), выберите систему, которая, по-видимому, предлагает наибольший потенциал для заражения, если критические контрольные точки не контролируются.

Сосредоточьтесь на проверке одной полной асептической технологической и упаковочной системы.Если после оценки выбранной вами системы будет сочтено необходимым или выгодным прикрыть другую во время той же проверки, сделайте это; но только если вы можете посвятить достаточно времени тщательной оценке второй системы.

Запланированные процессы должны быть зарегистрированы в FDA с перечислением критических факторов, необходимых для достижения состояния коммерческой стерильности для:

1. товар,
2. «стерильные зоны» системы стерилизации продукта (удерживающая трубка и оборудование после удерживающей трубки),
3. упаковочная система и,
4. упаковочный материал.

Фирма должна указать такую ​​информацию в форме FDA-2541c и приложениях к ней. Ознакомьтесь с этой формой и «Дополнением к системе асептической упаковки» к инструкциям по регистрации предприятия и регистрации процесса для подкисленных и малокислотных консервов. Копии каждого из них должны быть доступны в вашем округе или их можно получить у координатора регистрации LACF по телефону (202) 205-5282.

Просмотрите и сравните копии текущих запланированных процессов фирмы с теми, которые поданы в FDA.Зарегистрированные процессы могли быть получены во время предыдущей проверки; или они могут быть получены с использованием процедур, изложенных в Руководстве по инспекции LACF — Часть 1. Дополнительную информацию о предстерилизации и поддержании стерильности обработки, упаковочного оборудования и стерилизации упаковочного материала можно получить в Центре безопасности пищевых продуктов и прикладного питания (HFS). -617 — Регулирующая отрасль пищевой промышленности и технологий).

Изучите запланированные процессы, используемые фирмой, чтобы убедиться, что они были рекомендованы органом управления процессами (письмо, руководство по стандартным операционным процедурам, пересылка, бюллетень и т. Д.)). Не запрашивайте информацию о фактическом учреждении процесса, если это не указано в вашем округе или HFS-617 (см. Руководство по проверке LACF — Часть 1). Сравните критические факторы в зарегистрированном запланированном процессе, чтобы убедиться, что они соответствуют факторам в передаче от органа управления процессом. Сравните зарегистрированный процесс с письменной документацией от ответственного за процесс до обхода для более эффективной оценки критических компонентов в линии.

Ознакомьтесь с разделом в приложении, озаглавленном «Требуемая дополнительная информация для систем асептической упаковки», в котором подробно описываются процедуры, необходимые для приведения обработки и упаковки в состояние коммерческой стерильности и поддержания коммерческой стерильности на протяжении всех операций обработки.

Существует три основных типа нагрева продукта: прямой, косвенный и омический. О каждом типе речь пойдет отдельно. У использования каждого типа системы отопления есть свои преимущества и недостатки, достоинства и недостатки перечислены в Таблице I на странице 14.

Системы прямого нагрева — предусматривают конденсацию пара в продукте. Это можно сделать двумя способами:

1. Впрыск пара (Рис. 1): пар впрыскивается непосредственно в продукт, проходящий через камеру впрыска.
2. Паровая инфузия (Рис. 2): продукт распыляется в большую паровую камеру под давлением и стерилизуется при падении в виде пленки или капель через камеру. В большинстве случаев испарительная камера используется после удерживающей трубки для испарения добавленной воды, что приводит к быстрому охлаждению коммерчески стерилизованного продукта.

Системы косвенного нагрева — Включает использование оборудования для обмена теплом между нагреваемой поверхностью и продуктом. Есть три основных способа использования косвенного тепла в асептической обработке.Их:

1. Пластинчатые теплообменники — (Рисунок 3), где пластины в системе служат теплообменной поверхностью и барьером с циркулирующей горячей водой (для подогревателя) с одной стороны и продуктом с другой. Эта система аналогична тем, которые используются в индустрии пастеризованного молока, чаще всего используются для однородных жидкостей, таких как молоко и другие молочные продукты.
2. Трубчатые теплообменники (Рисунок 4), как правило, используют концентрические трубы в качестве поверхности барьера / теплообмена.Продукт протекает через внутреннюю трубу в двухтрубных системах и среднюю трубу в трехтрубных системах, при этом теплоноситель течет в противоположном направлении через другие трубы. В кожухотрубных теплообменниках, как показано на рис. 4, трубка может быть свернута в спираль внутри большого кожуха, при этом продукт также течет через трубку в направлении, противоположном потоку теплоносителя. Как и в случае пластинчатых теплообменников, в этих системах обычно обрабатываются однородные продукты, такие как молоко.
3. Скребковые теплообменники — (Рис. 5), состоят из вала мутатора со скребковыми лопастями, обычно концентрически расположенными внутри изолированной трубы теплообменника с рубашкой. Продукт прижимается к внутренней теплообменной / барьерной стенке с помощью насоса, который перемещает продукт через нагреватель. Лопасти, которые имеют небольшую степень независимого движения, затем «соскребают» скопившийся продукт с поверхности теплообмена. Нагревательная среда представляет собой циркулирующую воду или пар, который течет на противоположной стороне внутренней теплообменной / барьерной стенки.

   Эти теплообменные системы обычно используются для обработки вязких продуктов, таких как пудинги, или продуктов, содержащих твердые частицы, таких как определенные супы.

Омический нагрев — это относительно новый метод нагрева продукта, при котором электрический ток пропускается через подходящий проводящий продукт, вызывая нагрев продукта. Система работает в условиях непрерывного потока, когда продукт проходит через электроды в одной или нескольких нагревательных трубках с последующим охлаждением продукта на очищаемой поверхности, трубе в кожухе или пластинчатых теплообменниках.Электропроводность и электрическое сопротивление продукта влияют на скорость нагрева. Из-за этого состав продукта становится критически важным для процесса. Пищевые продукты, которые плохо проводят электрический ток, не подходят для омического нагрева.

Опишите методы, применяемые фирмой для обеспечения микробиологического качества сырья.

Определите, изменились ли какие-либо формулировки (например,g., изменение типа или количества крахмала) может отрицательно повлиять на адекватность термического процесса.

Определите, как фирма контролирует рецептуру и партии продукта, чтобы гарантировать соответствие продукта желаемым характеристикам.

Если продукт содержит твердые частицы в своей рецептуре (пудинг из тапиоки, некоторые соусы и супы и т. Д.), Проверьте запланированную передачу процесса от обрабатывающей организации, чтобы определить критические факторы, связанные с твердыми частицами.Задокументируйте, что процедуры фирмы достаточны для достижения соответствующих уровней для этих критических факторов. Например, если размер частиц является критическим фактором в соответствии с полномочиями по переработке, определите, как фирма гарантирует, что размер используемых частиц соответствует указанному размеру или меньше, или требуется ли период регидратации для сухих частиц. Задокументируйте процедуры фирмы для соответствия требованиям, установленным обрабатывающим органом.

Асептические процессы основаны на непрерывном потоке продукта через приемную трубу.Этот непрерывный поток зависит от насосов, и поэтому эти насосы имеют решающее значение в конструкции системы. 21CFR 113.40 (g) (i) (f) гласит: «Дозирующий насос должен быть расположен перед сборной трубой и должен работать для поддержания требуемой скорости потока продукта». В качестве дозирующего (иногда называемого синхронизирующим) насоса используется поршневой поршневой насос, поскольку он менее чувствителен к перепадам давления и проскальзыванию, чем центробежные насосы. Характеристики продукта могут определять тип используемого поршневого насоса.Когда падение давления в системе невелико (менее 150 фунтов) и продукт содержит только мелкие частицы или является однородным, можно использовать роторный поршневой насос. При более высоких перепадах давления и крупных твердых частицах обычно выбирают поршневой насос с возвратно-поступательным движением.

Дозирующие (синхронизирующие) насосы могут быть с регулируемой или фиксированной скоростью. В последнем нельзя изменить скорость откачки без демонтажа насоса. Если насос является устройством с регулируемой скоростью (например, имеет привод типа Ривза), должны быть предусмотрены средства предотвращения несанкционированного изменения скорости.Это может быть блокировка устройства или уведомление руководства, размещенное на нем или рядом с ним, с соответствующим предупреждением.

Расходомеры

Некоторые новые системы могут использовать расходомер для контроля потока продукта через систему. Расходомер может использоваться вместе с насосом с фиксированной скоростью и клапаном управления потоком или с насосом с регулируемой скоростью, управляемым расходомером. Когда используются эти системы управления потоком, чрезвычайно важно определить, как работает система управления потоком, процедуры, используемые для проверки скорости потока, и как система поддерживается.

Скорость потока продукта через удерживающую трубку влияет на время пребывания отдельного элемента в удерживающей трубке. Каждый жидкий элемент может иметь разную степень стерильности в зависимости от продолжительности времени, в течение которого конкретный элемент находится в удерживающей трубке (время пребывания). Конструкция системы, скорость откачки и характеристики продукта могут влиять на скорость потока через участки нагрева и удержания в системе. Вот почему состав продукта имеет решающее значение.

Время пребывания самого быстро движущегося элемента определяется и рассчитывается органом по обработке продукта, подвергаемого тепловой обработке.Затем обработчик документирует, что скорость потока и характеристики потока продукта не отличаются от тех, которые установлены ответственным за процесс. Указанная скорость потока продукта должна контролироваться или проверяться переработчиком в качестве рутинной части работы системы. Один из способов сделать это — сопоставить скорость потока в условиях холостого хода со скоростью насоса. Посредством подсчета ходов насоса за установленный период времени или путем оснащения насоса записывающим тахометром можно задокументировать косвенную запись расхода продукта.На эффективность некоторых насосов может влиять вязкость продукта и отсутствие давления или противодавления в системе. Таким образом, скорость откачки, установленная для воды, может не отражать истинную скорость потока пищевого продукта. Были разработаны различные типы устройств для измерения расхода, которые косвенно указывают на поток продукта. Использование расходомера для индикации расхода продукта должно быть подтверждено фирмой, и должна быть доступна документация, подтверждающая использование расходомера в качестве точного индикатора фактического расхода продукта.Физическое измерение потока продукта (например, 3 галлона в минуту, количество контейнеров за установленный интервал времени) может быть приемлемым методом для определения скорости потока продукта. Необходимо указать места отбора проб и температуру продукта, поскольку температура продукта может влиять на объем продукта. Если продукт направляется непосредственно на линию розлива, скорость заполнения продукта может быть определена в течение установленного периода времени и соотнесена со скоростью потока продукта. Существуют средства, при которых в поток продукта вводятся химические или радиологические индикаторы для измерения потока продукта.Однако эти методы обычно не используются на повседневной основе для проверки скорости потока продукта.

Задокументируйте процедуры валидации фирмы для обеспечения того, чтобы скорость откачки, определенная органом обработки, соблюдалась системой.

Стерилизатор (удерживающая трубка)

Устройство индикации температуры

должны быть оборудованы по крайней мере одним TID: Во время проверки убедитесь, что устройство соответствует спецификациям, перечисленным в 21 CFR 113.40 (g) (l) (i) (a). который дает параметры TID и частоту его проверки на точность.

Если система оборудована только одним устройством индикации температуры, датчик для этого устройства обычно располагается рядом с устройством регистрации температуры. Стеклянные ртутные термометры и другие устройства для индикации температуры являются эталонным прибором и, как указано в правилах, «должны проверяться на точность в соответствии с известным стандартом при установке и не реже одного раза в год в дальнейшем.«Правила не требуют ведения протоколов калибровки, однако, поскольку в качестве эталонного прибора для индикации температуры обработки важно, чтобы фирма могла задокументировать, что требуемые испытания на точность были выполнены. Если возможно, получите копии отчетов о тестировании на предмет точности, а также копии использованного метода и название фирмы или лиц, проводящих тесты.

Устройство регистрации температуры

21 CFR 113.40 (g) (l) (i) (b), в частности, говорится: «Устройство регистрации температуры должно быть установлено в потоке продукта на выходе из удерживающей трубы между удерживающей трубой и входом в охладитель.Далее говорится: «График температуры должен быть скорректирован так, чтобы он максимально соответствовал, но ни в коем случае не должен быть выше, чем у известного точного ртутного стеклянного термометра. «

Фирма также должна иметь средства для предотвращения несанкционированных изменений в настройке записывающего устройства.

Регистратор-контроллер температуры

21 CFR 113.40 (g) (l) (i) (c). Описывает, где должен находиться контроллер точного регистратора температуры, в соответствии со спецификациями таблицы регистрации.

Опишите работу регистратора-контроллера и назовите производителя. Далее говорится, что если он приводится в действие воздухом, фирме необходимо обеспечить подачу чистого сухого воздуха к контроллеру. Проверьте, есть ли фильтр на воздушной линии, и если да, то как часто его меняют или контролируют, чтобы обеспечить качество воздуха, подаваемого в контроллер.

В некоторых случаях у фирмы может быть регистратор-контроллер с двумя или более ручками, одна из которых обозначает температуру регистратора-регулятора на выходе из последнего нагревателя; и один, регистрирующий температуру на выходном конце удерживающей трубки.Опишите, как фирма регулирует контроллер записывающего устройства, как часто и какой эталонный прибор используется для настройки контроллера записывающего устройства. Ручки регулируются путем считывания показаний термометра и с помощью колесика на ручке для внесения корректировок, присущих конкретной конструкции.

От продукта к продукту Регенераторы

21 CFR часть 113.40 (g) (1) (i) (d), гласит: «Когда регенератор преобразования продукта в продукт используется для нагрева холодного нестерилизованного продукта… он должен быть спроектирован, работать и регулироваться таким образом, чтобы давление Количество стерилизованного продукта в регенераторе больше, чем давление любого нестерилизованного продукта в регенераторе, чтобы гарантировать, что любая утечка в регенераторе происходит из стерилизованного продукта в нестерилизованный продукт.”

Регистратор-регулятор перепада давления

21 CFR 113.40 (g) (1) (i) (e). Это средство контроля давления в регенераторе продукта к продукту. Устройство должно соответствовать спецификациям, указанным в нормах, и характеру управляющих воздействий, предпринимаемых устройством в случае ненадлежащего давления. Необходимо, чтобы один датчик давления располагался на выходе из регенератора стерилизованного продукта (точка самого низкого давления), а один — на входе в регенератор нестерилизованного продукта (точка самого высокого давления).

Во время проверки отметьте, где расположены датчики, и запишите их на технологической схеме. Кроме того, контроллер должен «проверяться на точность с помощью известного точного индикатора давления при установке и, по крайней мере, каждые три месяца работы после этого, или чаще, если необходимо …» Эта часть правил не касается ведения учета требование или рекомендация относительно этого графика тестирования, однако важно, чтобы фирма вела такие записи.Просмотрите копии отчетов о тестировании, а также копию использованной методологии и определите название фирмы или лиц, проводящих тесты. Эта информация должна быть включена в ОДП.

Трубка держателя продукта

21 CFR 113.40 (g) (1) (i) (f). Регламент гласит, что удерживающая трубка для стерилизации продукта должна быть спроектирована так, чтобы обеспечивать непрерывное удерживание каждой частицы пищи в течение, по крайней мере, минимального времени выдержки, указанного в запланированном процессе.

Для этого труба должна иметь наклон вверх не менее 0,25 дюйма на фут. Шаг удерживающей трубы можно определить с помощью Т-образного квадрата или с помощью линейного уровня. Убедитесь, что диаметр и длина удерживающей трубы соответствуют указанным в заявленном запланированном процессе и что наклон адекватен. Если удерживающая труба может быть разобрана (для очистки, ремонта и т. Д.), Запишите в EIR, как фирма гарантирует, что при повторной сборке она соответствует запланированным параметрам процесса.

Кроме того, удерживающая трубка должна быть спроектирована так, чтобы никакая часть трубки между входом для продукта и выходом для продукта не могла нагреваться.Удерживающие трубы могут быть изолированы для защиты удерживающей трубы от внешних экстремальных температур. Это допустимо до тех пор, пока к удерживающей трубе не будет приложен внешний источник тепла.

Система отвода потока —

21 CFR 113.40 (g) (1) (i) (h). Подробно опишите применяемый фирмой метод отвода потока нестерильного продукта от наполнителя или асептического расширительного бака, включая любую документацию от производственного органа, в которой могут быть перечислены конкретные рекомендации по проектированию и эксплуатации системы.Некоторые фирмы могут выбрать установку системы отвода потока. Регламент описывает, где должно быть установлено устройство, но не требует размещения устройства в линии. Если у него есть устройство или система автоматического отклонения потока, задокументируйте переменные (например, потерю температуры, потерю давления в регенераторе перехода от продукта к продукту и т. Д.), Которые активируют его для переключения потока. Задокументируйте, какая система используется, чтобы уведомить оператора о необходимости переключения систем с ручным управлением. Запишите, как регистрируются инциденты, связанные с утечкой, включая корректирующие действия и утилизацию переадресованного продукта.Убедитесь, что первый отводной дренаж стерилизуется после каждого использования и что устройство отклонения потока самотечного слива не используется.

Оборудование после удерживающей трубы

21 CFR 113.40 (g) (1) (i) (i). Попадание микроорганизмов в продукт может происходить через охладители продукта, асептические уравнительные резервуары, клапаны переключения потока, гомогенизаторы, асептические насосы или любое другое оборудование, расположенное ниже по потоку от удерживающей трубы. Вращающиеся или совершающие возвратно-поступательное движение валы и штоки клапанов должны быть оборудованы паровыми уплотнениями или другими эффективными барьерами в потенциальных точках доступа.Фирме необходимо контролировать эффективность этих уплотнений или барьеров для правильного функционирования во время операций.

Асептический расширительный бак — иногда используется фирмой как средство временного хранения стерильного продукта. Это делается для обеспечения непрерывной подачи продукта к разливочному устройству или для отвода стерильного продукта в случае остановки упаковочной машины. Перед запуском потока продукта расширительные баки стерилизуются паром или водой до любого воздушного фильтра в линии или до наполнительного клапана.Как правило, из асептических расширительных баков необходимо вентилировать, как и в автоклавах, чтобы не было оставшихся воздушных карманов, которые не позволили бы некоторым участкам внутри уравнительного резервуара достичь температуры стерилизации.

Как правило, обрабатывающий орган устанавливает этот график «вентиляции» или продувки воздухом, и у фирмы есть документация от этого органа, определяющая процедуру стерилизации. Во время инспекции проверьте данные фирмы, чтобы убедиться, что график чистки указан.В асептических уравнительных резервуарах должно поддерживаться избыточное давление стерильного воздуха для обеспечения надлежащей работы (т. Е. Потока продукта к наполнителю). Стерильный воздух или газ получают путем сжигания и / или фильтрации. Определите, как фирма контролирует избыточное давление стерильного воздуха или газа и метод достижения стерильности. В случае сжигания, система контроля термопары, вероятно, является самым простым средством. Если используется стерильный фильтр, определите характеристики фильтра, расположение фильтра и количество фильтров. Определите, меняет ли фирма фильтр с интервалами, рекомендованными производителем или технологическим органом для их метода использования.Изменения фильтров должны быть задокументированы в протоколах обработки. Определите, учла ли компания какие-либо возможные неблагоприятные эффекты, которые могут повлиять на срок службы фильтра, например, повторяющийся контакт с сожженным воздухом.

Если используется система фильтрации и выходная сторона стерилизуется паром во время цикла вентиляции или продувки, определите, учли ли технологические органы или производитель влияние пара на фильтр. Фирма должна иметь процедуру для определения целостности фильтров.

Существует несколько коммерческих методов проверки целостности фильтров, но в основном фирма должна использовать метод, рекомендованный поставщиком фильтров или их ответственным за процесс. Нарушение целостности фильтра является отклонением от процесса и ставит под сомнение коммерческую стерильность всего производимого продукта.

Газы, такие как стерильный азот или диоксид углерода, по отдельности или в комбинации, могут использоваться для создания избыточного давления и создания барьера для стерилизации. Определите процедуру фирмы для обеспечения стерильности этих газов и любых фильтров, используемых для фильтрации стерильных газов, включая линии / трубопроводы ниже по потоку до точки, где газы доставляются в асептическую систему.

Обратное давление — Обратные клапаны или отверстия могут использоваться в асептических системах, чтобы гарантировать, что давление в системе предотвращает всплеск продукта в удерживающей трубке. Мигание в удерживающей трубке может вызвать увеличение скорости продукта, тем самым уменьшая время пребывания, указанное в графике процесса. Определите, как фирма контролирует правильную работу обратного клапана (ов). Например, в системах прямого нагрева (например, нагнетание пара или инфузия) добавленная вода из конденсированного пара должна удаляться для стандартизированных продуктов, таких как молоко.Обычно это делается в стерильной «вспышке» или камере расширения. Фирма должна иметь клапан обратного давления для отделения удерживающей трубы от испарительной камеры, чтобы предотвратить «мигание» (то есть, расширение водяного пара в виде пара) в удерживающей трубе.

Система управления — Системы нагрева и стерилизации продуктов включают весь спектр, от систем с ручным управлением до высокоавтоматизированных систем с компьютерным управлением. Для систем с ручным управлением просмотр журналов производства и диаграмм записи руководством представляет собой основной метод проверки того, что продукт получил запланированный процесс.Для высокоавтоматизированных систем существуют средства управления, которые при правильной работе автоматически исключают упаковку нестерильного продукта в стерильные контейнеры. Следовательно, рутинная проверка и калибровка автоматических средств управления представляют собой дополнительный метод проверки того, что продукт получил запланированный процесс. Во время проверки получите у фирмы копию последней записи о проверке и калибровке для автоматических средств управления. В него должны быть включены использованная методология, частота тестирования и лица, проводившие тесты.Компьютеризированные системы управления должны пройти валидацию при установке, чтобы гарантировать, что они будут работать, как задумано.

Ввод в эксплуатацию

21 CFR 113.40 (g) (l) (i) (ii) (a): Фирма должна следовать зарегистрированному запланированному процессу для приведения оборудования в состояние коммерческой стерильности (т. Е. Как указано в «Требуемой дополнительной информации для Системы асептической упаковки ») до« перехода »на стерилизацию продукции.Определите, расположен ли датчик температуры, который контролирует температуру стерилизации оборудования, в определенной самой холодной точке на линии, ниже по потоку от приемной трубы. Этот датчик обычно расположен за клапаном, который соединяет трюмную трубку с разливочным оборудованием. Если, например, фирма использует устройство индикации температуры (например, стеклянный ртутный термометр) на выходном конце удерживающей трубки для индикации стерилизации оборудования, задокументируйте, как фирма гарантирует, что оборудование после удерживающей трубки достигает нужной температуры.

И определите, как фирма обеспечивает надлежащий переход с воды на продукт, не вызывая отклонений в процессе стерилизации оборудования или цикла стерилизации продукта. Например, температура стерилизации для приведения оборудования в состояние коммерческой стерильности может быть на несколько градусов по Фаренгейту больше или меньше температуры, предусмотренной для продукта.

Записи

21 CFR 113.40 (g) (l) (i) (ii) (e).Записи мониторинга для асептической обработки должны, при необходимости, включать показания для следующих

1. Устройство (а) индикации температуры на выходе из удерживающей трубки.
2. Регистратор температуры на выходе из приемной трубы.
3. Регистратор-контроллер температуры на выходе из конечного нагревателя.
4. Регистратор-контроллер перепада давления, если используется регенератор продукта в продукт.
5. Расход продукта (в галлонах в минуту, банках в минуту и ​​т. Д.).
6. Асептический расширительный бак избыточного давления стерильного воздуха или другие средства защиты.
7. Правильная работа паровых уплотнений.
8. Стерилизация оборудования или цикл «предстерилизационный». Записи должны указывать, когда оборудование находится в предстерилизационном цикле, когда происходит отклонение потока и когда продукт проходит через систему.

Отклонения процесса

Ниже приводится список возможных отклонений от процесса:

1. Падение температуры в выдерживающей трубке.
2. Потеря перепада давления в регенераторе продукта к продукту.
3. Потеря давления стерильного воздуха или газа или другого уровня защиты в асептическом расширительном баке.
4. Нарушение стерильности подачи воздуха или газа в стерильные зоны.
5. Критические факторы запланированного процесса за пределами спецификаций.
6. Увеличение скорости насоса-дозатора с регулируемой скоростью.

Если происходит отклонение процесса и потенциально нестерильный продукт заполняется в контейнер, фирма должна выполнить корректирующие действия в отношении затронутого продукта.Это может включать повторную обработку или уничтожение продукта или оценку процесса органом, занимающимся обработкой. Во время проверки проанализируйте все отклонения от процесса и, если фирма решила, чтобы отклонение было оценено уполномоченным по процессу, соберите эти записи и ответы и отправьте их в качестве доказательства в EIR.

Очистка и повторная стерилизация после отклонений процесса

Фирма должна иметь письменные процедуры для обеспечения эффективной очистки и повторной стерилизации стерильной части продукта на линии после отклонения от процесса.Определите цикл повторной стерилизации оборудования. Если он отличается, определите, рекомендовал ли орган, ответственный за процесс, цикл повторной стерилизации, и есть ли у фирмы письмо или другая форма документации, устанавливающая параметры цикла повторной стерилизации.

При просмотре записей об отклонениях от процесса убедитесь, что они документируют:

1. Очистка системы после отклонения от процесса.
2. Возвращение стерилизатора продуктов и всего последующего оборудования в состояние коммерческой стерильности.
3. Удаление любого подозрительного продукта, разлитого в контейнеры.

Если фирма не ведет соответствующие записи, это должно быть предметом обсуждения на FD483.

Запланированный процесс переработки продуктов

Если фирма решает переработать продукт, который был связан с отклонением, необходимо принять во внимание несколько факторов, поскольку не все продукты будут течь одинаково. Если исходный продукт имеет характеристики турбулентного потока, продукт может демонстрировать характеристики ламинарного потока после первого процесса.Особенно это касается продуктов, содержащих крахмал или другие связующие. Кроме того, такие факторы, как переработка пораженных партий по отдельности или вместе; или смешанный с новым продуктом может повлиять на процесс. Во время проверки определите, учтены ли все факторы, которые могут повлиять на переработку, были учтены фирмой.

Системы стерилизации упаковки

В настоящее время в США используются различные системы асептического розлива и упаковки для кислых и малокислотных пищевых продуктов.Как правило, их можно описать включением в одну из шести категорий:

1. Металлические контейнеры и крышки. На рисунке 6 показана система, в которой контейнеры стерилизуются и наполняются с использованием перегретого пара в качестве стерилизующей среды. (например, система перегретого пара).
Картон
2. Webfed: Рисунки 7 и 8 стерилизованы перекисью водорода и нагреванием.
3. Предварительно сформованный или частично сформированный картон стерилизуют перекисью водорода и нагреванием.
4. Предварительно формованные пластиковые стаканчики: Рис. 9 также стерилизуют перекисью водорода и нагреванием.
5. Термоформ-заполнение-уплотнение: На рисунке 10 показана система, в которой для стерилизации используется перекись водорода и тепло или тепло совместной экструзии.
В системе
6. Bag-in-Box используются контейнеры, предварительно стерилизованные гамма-излучением.

Фирма должна зарегистрировать запланированный процесс для своей системы упаковки, включая дополнительную информацию о критических факторах, участвующих в приведении системы в состояние коммерческой стерильности до запуска. Это делается в форме FDA 2541c — «Подача заявки на производство пищевых консервов для систем асептической упаковки».«Кроме того, у фирмы должно быть в досье, письмо или другая документация от органа управления процессами, который поддерживает зарегистрированный запланированный процесс. Получите копию документа, сравните ее с зарегистрированным запланированным процессом и тщательно ознакомьтесь с критическими факторами. . Отклонение от любого из этих указанных критических факторов представляет собой отклонение от процесса, с которым необходимо обращаться в соответствии с 21 CFR 113.89.

ОПЕРАЦИИ ПО СТЕРИЛИЗАЦИИ, НАПОЛНЕНИЮ И ЗАКРЫТИИ КОНТЕЙНЕРОВ

Металлические контейнеры и крышки

Оборудование и органы управления

Регистрирующие устройства — Чтобы продемонстрировать, что требуемая стерилизация выполнена, фирмы используют автоматические записывающие устройства.Во время проверки важно задокументировать количество, расположение и тип используемых датчиков. В системе паровой стерилизации, такой как установка Dole, основными компонентами системы являются:

1. секция стерилизации контейнеров,
2. заправочная секция,
3. крышка или крышка стерилизационного устройства и
4. секция закрытия контейнера.

Вы также должны знать, какие критические факторы отслеживаются, например, температура, скорость потока стерилизационной среды и т. Д…И определите, точно ли они записываются. Определив, где находятся записывающие устройства, убедитесь, что оборудование соответствует по количеству и расположению оборудованию, включенному в запланированный процесс.

Фирма также должна гарантировать точность своих записывающих устройств.

Если используются термометры показывающего типа, они должны соответствовать регистрирующим термометрам. Для TID (устройств индикации температуры) определите, калибрует ли их фирма
, как и когда, и выполняется ли калибровка в запланированных условиях процесса.

Получите копию последней калибровки, использованной методики и того, кто проводил испытание. Важно, чтобы оборудование для мониторинга было откалибровано в рабочем диапазоне (например, если температура составляет 200 ° C (400 ° F) для горячего воздуха, используемого для стерилизации контейнеров, то оборудование для мониторинга следует откалибровать в соответствии с этой температурой).

Стерильная вода — В асептических системах с использованием металлических контейнеров и укупорочных средств, если холодная стерильная вода направляется на дно контейнеров после наполнения (или на крышки до закрытия), определите меры контроля компании для обеспечения стерильности воды. на постоянной основе.Попадание нестерильной воды в зону розлива приведет к отклонению процесса.

Метод определения времени — Опишите меры контроля фирмы для обеспечения надлежащего времени пребывания контейнеров и крышек в стерилизующей среде. Проверьте скорость потока в контейнере / укупорочном средстве с помощью откалиброванного секундомера. Если компания использует автоматическое устройство для контроля скорости потока контейнера / укупорочного средства, определите, как фирма обеспечивает точность этих устройств. Опишите метод предотвращения несанкционированного изменения скорости.

Для стерилизатора консервных банок Dole крайне важно, чтобы стерилизатор всегда работал на полной скорости, поскольку любые перерывы в потоке контейнеров через стерилизатор могут привести к тому, что некоторые банки будут храниться меньше запланированного времени. Это связано с тем, что конвейер или цепь, проходящая через стерилизатор, может попытаться «догнать» ведомые банки к ведущим банкам, где возникает зазор в контейнерах.

Эксплуатация

Start-Up- Фирма должна следовать зарегистрированному и запланированному процессу для приведения оборудования в состояние коммерческой стерильности.Отсутствие надлежащей стерилизации оборудования по времени / температуре является отклонением от процесса и должно обрабатываться в соответствии с 21 CFR 113.89. Термопара, показывающая температуру стерилизации для оборудования, вероятно, будет той же, что используется для определения температуры во время операций, и должна быть расположена в наиболее трудной для стерилизации зоне.

Пригодность контейнеров и крышек для стерилизации —
Определите, как фирма гарантирует, что контейнеры и крышки чистые и сухие до входа в паровые камеры.Мокрые емкости или крышки вызывают конденсацию пара на поверхности емкости. Поскольку стерилизация происходит в атмосферных условиях, это означает, что температура корпуса и / или крышек банок будет подниматься не выше 100 ° C (212 ° F), тогда как температуры, используемые в блоке перегретого пара, предназначены для обеспечения температуры банок. примерно 215,6–218,3 ° C (420–425 ° F), а температура покрытия — примерно 210–212,8 ° C (410–415 ° F).

Отклонения процесса

Потеря температуры — Во время запуска неспособность достичь температуры-времени, указанной в запланированном процессе для контейнеров, укупорочных средств и оборудования, является отклонением от процесса и должна обрабатываться в соответствии с 21 CFR 113.89.

В случае потери температуры во время розлива определите, какие корректирующие действия предпримет фирма. Корректирующее действие должно включать такие вещи, как автоматическая или ручная остановка линии, изменение направления продукта и устранение проблемы. Если продукт был разлит в контейнеры, часть корректирующих действий будет заключаться в том, чтобы убедиться, что затронутый продукт отделен.

Уменьшение времени пребывания — Если есть уменьшение времени пребывания, определите, есть ли система сигнализации или автоматическая остановка линии.В противном случае определите, перенаправлен ли продукт или заполненные контейнеры правильно разделены. Фирма также должна гарантировать, что устройство должным образом повторно стерилизовано после отклонения.

Потеря стерильности охлаждающей воды — Определите, какова вероятность того, что произойдет потеря стерильности охлаждающей воды, и каковы процедуры фирмы для распознавания отклонения и какие корректирующие действия будут приняты.

Устранение замятий контейнера — Если оператору необходимо войти в стерильную зону (например,g., закаточная машина) с инструментами для устранения застревания банок; определить процедуры фирмы по повторной стерилизации зоны.

(Webfed, Preform или термоформованные заполняются / герметизируются с использованием перекиси водорода в качестве стерилизующей среды)

Оборудование и средства управления — Подробно опишите процедуру компании по мониторингу следующего (если они указаны как критические факторы для запланированного процесса):

1. Норма расхода перекиси
2. Концентрация перекиси
3. Уровень перекиси (если используется метод погружения) или осаждение (если используется роликовый аппликатор или туманообразователь)
4. Температура согревающего воздуха, используемого для транспортировки химических стерилизаторов
5. Температура воздуха или нагревательного элемента (для удаления h3O2 и завершения стерилизации)
   Примечание: Обычно нагревание осуществляется одним из четырех основных методов:
   1. Трубчатый нагреватель, расположенный в центре картона с подачей полотна, когда он формируется в трубку.
   2. Горизонтально расположенный нагревательный элемент, расположенный над емкостями, в которые распылен h3O2.
   3. Воздушные ножи, которые продувают горячим стерильным воздухом картон или пластик после выхода из погружного резервуара для h3O2 и перед формованием.
   4. Барабан из нержавеющей стали с водяным нагревом.
6. Температура стерильного воздуха (для сжигаемого воздуха, который затем охлаждается и используется для создания избыточного давления в стерильной зоне)
7. Стерильные воздушные фильтры
8. Стерильный воздух с избыточным давлением
9. Газовая промывка — азот или другие стерильные газы, используемые для промывки оборудования или свободного пространства контейнера, необходимо стерилизовать и поддерживать в стерильном состоянии.Определите, как фирма гарантирует, что стерильность газа не нарушена. Определите график технического обслуживания фильтров, используемых для стерильных газов.

Определите, расположены ли датчики для мониторинга вышеуказанных факторов, чтобы обеспечить уверенность в том, что фактор контролируется в самом холодном или самом слабом месте. Кроме того, узнайте, обслуживает ли фирма форсунки, которые используются для распыления химических стерилизаторов, или используются ли насосы, такие как перистальтические насосы, для контроля объемов распыляемого стерилизующего средства.

Start-Up- Фирма должна следовать запланированному процессу подачи документов в отношении приведения оборудования в состояние коммерческой стерильности перед наполнением. Фирмы обычно используют комбинацию пара или горячей воды (для разливочного устройства) и тумана или спрея h3O2 для стерильного формования (при необходимости), заполнения и закрытия или герметизации зон, которые вместе часто называют «стерильным туннелем» или « стерильная зона ». Нагревание воздуха для транспортировки туманных стерилизаторов и температура воздуха для сушки часто являются критическими факторами, поскольку они способствуют стерилизации.

Упаковочные материалы, процедуры обращения — Определить процедуры фирмы для обеспечения высокого микробиологического качества получаемого и используемого упаковочного материала.

Отклонения от процесса — Многие из этих упаковочных систем или устройств оснащены элементами управления, которые при правильном функционировании автоматически останавливают машину и предотвращают упаковку стерильного продукта в недостаточно стерилизованные контейнеры. Решающее значение имеет определение того, что эти средства управления или «охранники» будут работать, как задумано (т.е., в случае несоблюдения фактора, определенного как критический для запланированного процесса, машина фактически отключится автоматически). Определить:

1. Кто калибрует или проверяет автоматические элементы управления или ограждения на предмет правильной работы, а также частоту этих проверок и получает копию последней методологии калибровки и результатов.
2. Как фирма оспаривает систему контроля и, если возможно, получить копию процедуры, а также копию самых последних результатов.

Хотя эти системы обычно работают в автоматическом режиме, большинство из них, если не все, похоже, оснащены возможностью ручного обхода автоматических средств управления. Определите, при каких обстоятельствах машина будет работать в ручном режиме, будет ли продукт упаковываться в этом режиме, и кто имеет право заказывать такую ​​операцию. Также определите, не будет ли обнаружено непреднамеренное ручное управление во время обычного просмотра записей обработки.

В отношении любых средств контроля или защиты, которые не контролируются автоматически и имеют решающее значение для запланированного процесса, определить, как будет обнаруживаться отклонение процесса и как фирма будет справляться с такой ситуацией?

Испытание остаточного содержания h3O2

Опишите фирменную процедуру тестирования остатков h3O2 на упаковочном материале.Соответствует ли остаточный уровень требованиям 21 CFR Part 178.1005 (d)?

Оборудование и средства управления — Опишите процедуру компании по мониторингу следующего (если указано как критическое для запланированного процесса):

1. Предварительная стерилизация (доведение оборудования до состояния коммерческой стерильности перед термоформованием и наполнением)
2. Температура поверхности в различных компонентах стерильной зоны.
3. Время выдержки после того, как температура достигла значения, указанного в запланированном процессе.
4. Превышение давления воздуха в стерильной зоне.

Обработка —

1. Фильтры для стерильного воздуха, обеспечивающие избыточное давление воздуха во время операций обработки, должны быть заменены после определенного количества использований, поскольку они находятся в контакте со сгоревшим воздухом во время цикла предстерилизации. Определите, как часто меняются фильтры, чтобы соответствовать требованиям, указанным в запланированном процессе, и как компания это документирует.

Опишите меры, применяемые фирмой для обеспечения защиты стерильного внутреннего слоя материала стакана и крышки при получении и использовании. Описать процедуры стерилизации сращиванием рулонов материала чашек и крышек.

Эксплуатация — Определите процедуру фирмы для обеспечения того, чтобы оборудование было приведено в состояние коммерческой стерильности, и что воздействие стерильного внутреннего слоя на стерильную зону в начале цикла предстерилизации выполняется в таком состоянии. способ сохранения стерильности как упаковочного материала, так и стерильной зоны заполнения-запечатывания формы (стерильный туннель).

Отклонения процесса — Получите тот же тип информации, который обсуждался ранее в разделе отклонения процесса, связанные с системами, использующими химические стерилизаторы (например, h3O2).

Несколько фирм-производителей предлагают большие мешки навалом, способные вместить несколько сотен галлонов продукта для асептического розлива. Эти пакеты обычно предварительно стерилизуются радиацией. Пакеты стабилизируются внешней картонной коробкой во время наполнения и транспортировки.Внешнюю картонную коробку можно использовать повторно несколько раз, однако пакеты и наполнительные клапаны используются только один раз. Каждый мешок оснащен приспособлением или клапаном, который при использовании подходящего наполнителя позволяет производить асептическое наполнение и опорожнение мешка. В зависимости от системы наливное сопло можно стерилизовать с помощью химикатов (например, перекиси водорода) или пара.

Оборудование и органы управления — Подробно опишите процедуры для мониторинга следующего:

1. Работа фурнитуры.
2. Если для стерилизации фурнитуры используется пар, отслеживается процесс стерилизации.
3. Если для стерилизации фурнитуры используются химические вещества, отслеживается их концентрация.
4. Какие процедуры использует фирма, чтобы гарантировать получение и поддержание стерильных упаковочных материалов в стерильном состоянии.

Примечание. Процедуры, используемые для стерилизации приспособления, устанавливаются уполномоченным по технологическому процессу.

Наблюдения и измерения рабочих условий или факторов, критических для запланированного процесса, должны производиться и регистрироваться с интервалами, достаточными для того, чтобы гарантировать поддержание продукта в состоянии коммерческой стерильности.Эти измерения следует проводить с интервалами, не превышающими одного часа. Опишите процедуры ведения документации фирмы для мониторинга критических контрольных точек на упаковочных системах или единицах. При первоначальных проверках соберите пустые копии использованных регистрационных форм и опишите тип записанной информации.

Подробно опишите систему оценки закрытия тары фирмы. Для металлических контейнеров и крышек проверьте соответствие требованиям 21 CFR 113.60 (а) и (а) (1). Определите источник и получите копии любых инструкций по закрытию контейнеров.

Опишите процедуры обработки фирмы после обработки. Проверить соответствие спецификациям, установленным производителем тары. Подробно опишите любые отклонения от рекомендаций поставщика контейнеров по постобработке.

Опишите программу обучения, проводимую фирмой для операторов систем или установок стерилизации продукции и упаковки.Фирма должна поддерживать задокументированную программу обучения операторов систем стерилизации и упаковки. Определите, предлагают ли производители оборудования дополнительную техническую поддержку.

Оценить системы упаковки процедур обслуживания фирмы. Обратите особое внимание на ту часть системы стерилизации продукта, которая находится за приемной трубкой. Например, пластинчатые теплообменники подвержены образованию отверстий под штифты, трещинам изгиба и утечкам через прокладки.Это будет критически важная зона обслуживания для такого теплообменника (такого как регенератор продукта к продукту или охладителя продукта), расположенного после удерживающей трубы. Правильное обслуживание линейных статических уплотнений или прокладок в трубопроводе системы после удерживающей трубы, особенно от выходного конца конечного охладителя до наполнителя, также имеет решающее значение. Фирма должна поддерживать задокументированную программу технического обслуживания всего оборудования. Техническое обслуживание следует проводить по минимальному графику, рекомендованному производителем оборудования.

См. Примерную таблицу 2 IOM для руководства.

Инкубационные тесты. Инкубация не является обязательным требованием правил. При выполнении фирмой определить:

1. , если производится статистический отбор проб из контейнеров.
2. сколько контейнеров инкубируется.
3. время и температура инкубации.
4. фирменных технических условий на приемку лота.
5. , если фирмы обнаруживают порчу, проводят ли они диагностику порчи для определения причины.Укажите метод и опишите порядок размещения партии.

Процедуры оценки различных контейнеров, используемых для асептической упаковки LACF, содержатся в Руководстве по проверке LACF, часть 3.

ТАБЛИЦА I: ПРЕИМУЩЕСТВА И НЕДОСТАТКИ:

Преимущества:

1. Быстрое нагревание и охлаждение, что снижает органолептические повреждения продукта во время нагрева.
2. Меньше обрастания или «пригорания» продукта в нагревателе.

Недостатки:

1. Из-за больших объемов пара, который необходимо конденсировать, управление системами прямого нагрева может быть затруднено.
2. Добавление воды (из-за конденсации пара) увеличивает объем продукта примерно на 1% на каждые 10 ° F повышения температуры выше начальной температуры продукта, когда он поступает в стерилизатор продуктов. Это увеличение объема продукта должно быть компенсировано органом управления технологическим процессом, устанавливающим тепловые процессы, если скорость потока контролируется до прямого нагрева.В таком случае необходимо контролировать и регистрировать начальную температуру (объем увеличивается с температурой). Для этих систем расход не требует компенсации увеличения объема.
3. Пар, используемый для прямого нагрева продукта, должен быть кулинарного качества (подходить для контакта с пищевыми продуктами). Кулинарный пар должен производиться в условиях, отвечающих требованиям безопасности котловой воды. Убедитесь, что маркировка составов для очистки котловой воды соответствует требованиям 21 CFR 173.310, проверив маркировку инвентаря или изучив гарантийные письма.

Преимущества:

1. Вы можете контролировать температуру нагреваемых продуктов.
2. Вы можете обрабатывать вязкие продукты (например, пюре, пудинги и основы для коктейлей), не поджигая их.
3. Энергосбережение (например, использование стерилизованного продукта для нагрева нестерилизованного продукта и, таким образом, охлаждения стерилизованного продукта).

Недостатки:

1. Возможен сдвиг частиц.

Преимущества:

1. Быстрый нагрев
2. Может обрабатывать продукты с дискретными частицами.

Недостатки:

1. Требуется обширное валидационное тестирование процесса.
2. Комплексная система управления.

Вернуться на: В начало страницы | Начало инспекции

Влияние повторной стерилизации и времени хранения на стерильность бумажных / пластиковых пакетов

Eur J Dent.2018 июль-сен; 12 (3): 417–421.

Яда Пуангса-Ард

¹ Кафедра расширенной общей стоматологии, стоматологический факультет, Университет Махидол, Бангкок, Таиланд

Сроизири Тавебун

² Кафедра микробиологии полости рта, факультет стоматологии, Махидол, Таиланд

Наттини Джантаратнотаи

³ Кафедра фармакологии, Факультет естественных наук, Университет Махидол, Бангкок, Таиланд

Праевпат Пачимсават

¹ Кафедра расширенной общей стоматологии, стоматологический факультет, Университет Махидол

¹ Кафедра продвинутой общей стоматологии, Факультет стоматологии, Университет Махидол, Бангкок, Таиланд

² Кафедра микробиологии полости рта, Факультет стоматологии, Университет Махидол, Бангкок, Таиланд

³ Кафедра фармакологии, Факультет наук, Университет Махидол, Бангкок, Таиланд

Это журнал с открытым доступом, и статьи распространяются в соответствии с условиями Creative Commons Attribution-NonCommercial-ShareAlike 4.0, которая позволяет другим создавать ремиксы, настраивать и развивать работу в некоммерческих целях при условии предоставления соответствующего кредита и лицензирования новых творений на идентичных условиях.

Реферат

Цели:

Пакеты из бумаги / пластика — широко используемые упаковочные материалы для автоклавирования медицинского и стоматологического оборудования. Хотя эти пакеты рекомендуются для одноразового использования, в Таиланде они, как правило, используются повторно.Это исследование было направлено на определение способности бумажных / пластиковых пакетов сохранять стерильность после нескольких процессов стерилизации и хранения в закрытой среде до 6 месяцев.

Материалы и методы:

Всего 6720 пакетов из бумаги / пластика были разделены на четыре экспериментальные группы: новые пакеты, 1, 3 и 5 повторно стерилизованные пакеты. Кусок фильтровальной бумаги был помещен внутрь каждого пакета, и пакет был запечатан, стерилизован и хранился до 6 месяцев.В конце каждого периода хранения пакет открывали и фильтровальную бумагу переносили в культуральный бульон для культивирования микробов для определения стерильности. Отрицательный и положительный контроли также использовались для валидации процедур.

Результаты:

Вся фильтровальная бумага в экспериментальных группах, а также в группе отрицательного контроля оставалась стерильной до 6 месяцев хранения в закрытой среде. Напротив, вся фильтровальная бумага в группе положительного контроля показала микробное загрязнение.

Выводы:

В условиях закрытого хранения бумажные / пластиковые пакеты, прошедшие несколько процессов стерилизации (повторная стерилизация до 5 раз), по-прежнему сохраняли хорошую барьерную эффективность и оставались стерильными до 6 месяцев.

Ключевые слова: Микробное заражение, бумажные / пластиковые пакеты, повторная стерилизация, стерильность, время хранения

ВВЕДЕНИЕ

Паровая стерилизация медицинского / стоматологического оборудования является важным процессом для предотвращения инфицирования пациентов, подвергающихся медицинским / стоматологическим процедурам.[ ¹ ] Одним из важнейших аспектов стерилизации является упаковка, которая играет важную роль в сохранении стерильности медицинского / стоматологического оборудования и в предотвращении микробного загрязнения из внешней среды после процесса стерилизации. [ ² ] Кожух из бумаги / пластика. пакеты являются широко используемым упаковочным материалом для стерилизации паром в автоклаве благодаря удобству использования, видимости содержимого и эффективности. [ ³ ] Бумажная сторона состоит из сложных целлюлозных волокон, а другая сторона — из ламинированного прозрачного полиэстера. / полипропилен.[ ^{3 , 4} ] Каждая сторона соединяется термосваркой. [ ⁴ ] Пакеты следует проверять, чтобы гарантировать полное закрытие упаковки до и после стерилизации.

После процесса стерилизации оборудование обычно не используется сразу, а хранится для дальнейшего использования. Безопасное хранение зависит от условий окружающей среды хранения. Предыдущие исследования показали, что хранение стерилизованного оборудования в открытых средах, таких как открытые полки, приводит к более быстрому проникновению микробов, чем хранение в закрытых шкафах с пылезащитными крышками, [ ⁵ ] и использование различных упаковочных материалов (многоразовые тканые пакеты, одноразовые нетканые пакеты и пакеты из полипропилена) не влияли на время безопасного хранения.[ ⁶ ] Это указывает на то, что условия хранения могут быть более важным фактором для поддержания стерильности, чем тип упаковочного материала.

Обследование стоматологической упаковки автоклавов в Таиланде показало, что бумажный / пластиковый пакет был наиболее часто используемым упаковочным материалом для паровой стерилизации как в больницах, так и в частных клиниках. [ ⁷ ] Хотя эти пакеты рекомендованы производителем для одноразового использования, [ ^{8 , 9} ] почти все эти клиники повторно использовали пакеты.Наиболее частое время повторной стерилизации составляло 3 раза, при этом максимальное время повторного использования составляло 5. Однако влияние повторного использования пакетов и целостность повторно используемых пакетов в этом исследовании не изучались. Действительно, исследований, посвященных влиянию повторной стерилизации на упаковочный материал, мало. Большинство исследований, касающихся повторной стерилизации, сосредоточено на самих медицинских / стоматологических инструментах, а не на упаковке. [ ^{10 , 11} ] Даже несмотря на то, что упаковочный материал также является важным фактором сохранения стерильности.

Различные факторы могут привести к потере стерильности этих пакетов, включая барьерную эффективность самого пакета из бумаги / пластика, процесс упаковки, факторы окружающей среды (закрытые или открытые) и неправильное обращение с упаковками из-за человеческой ошибки. Одним из критических факторов повторного использования пакетов является ухудшение барьерной эффективности этих бумажных / пластиковых пакетов после многократных процессов стерилизации. Если процесс повторной стерилизации нарушил стерильную целостность пакетов и привел к сокращению времени хранения или риску контаминации, эта информация будет полезна при рассмотрении возможности повторного использования этих пакетов.Целью этого исследования было определение барьерной эффективности бумажных / пластиковых пакетов в отношении сохранения стерильности после повторной стерилизации 1, 3 и 5 раз и после хранения в закрытой среде в течение до 6 месяцев.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Протокол исследования и подготовка бумажных / пластиковых пакетов

Было четыре экспериментальных группы и две контрольные группы, как показано на.

Подробная информация об экспериментальной и контрольной группах

Бумажные / пластиковые пакеты были приготовлены из стерилизационных трубчатых рулонов (Stericlin See-Through Reels, VP Medical Packaging, Германия) на 7.62 см × 12 см за штуку. Каждый пакет содержал внутри кусок фильтровальной бумаги 0,5 см × 2 см (бумага Whatman, Patterson Scientific, Англия) и кусок внутреннего химического индикатора (3M Comply SteriGage Chemical Integrator, 3M, США). Затем пакеты были запечатаны на 1 см снизу и на 3 см сверху термосваркой (Euroseal, Euronda S.p.A., Италия), как показано на рис. Каждый запечатанный пакет проверяли на наличие пузырей, разрывов, складок или складок, а также отверстий и прожогов, чтобы убедиться в целостности. Повторно стерилизованные пакеты не запаивались в первых циклах; они были запечатаны и помещены в фильтровальную бумагу и внутренний химический индикатор только в последнем цикле стерилизации [].В группе положительного контроля пакет пробивали как через бумажную, так и через пластмассовую стороны, а также делали два надреза по бокам пакета, чтобы нарушить целостность барьера []. Ленту для автоклава (3M ESPE Autoclave Steam Indicator Tape, 3M, USA) помещали на пластиковую сторону пакета. Пакеты располагали вертикально, и бумажная сторона контактировала с пластиковой стороной следующего пакета, не касаясь стенки камеры автоклава (M11 UltraClave, Midmark Corporation, США).Все образцы стерилизовали при 121 ° C и давлении 15 фунтов на квадратный дюйм в течение 30 минут.

Подготовка бумажных / пластиковых пакетов. (а) Запечатанный пакет, содержащий фильтровальную бумагу и внутренний химический индикатор. (b) Незапечатанный пакет, стерилизованный в предыдущих циклах для групп R1, R3 и R5. (c) Пакет для положительного контроля с отверстиями и надрезами для нарушения целостности барьера

Мониторинг стерилизации

К каждому циклу стерилизации применялись три режима мониторинга: физический, химический и биологический. Физический мониторинг представлял собой прямое наблюдение за датчиками на автоклаве во время процесса стерилизации.Химический мониторинг проводился с использованием внутреннего химического индикатора и автоклавной ленты в качестве внешнего химического индикатора. Оба типа химических индикаторов меняют цвет после стерилизации. Для биологического мониторинга пробирки со спорами (3M Attest, 3M, USA) помещали в центр и противоположные углы лотка автоклава. После процесса стерилизации пробирки со спорами инкубировали при 56 ° C в течение 48 часов для оценки роста микробов.

Хранение

Все стерилизованные образцы хранили в закрытых пластиковых ящиках в течение 1, 2, 3, 4, 5 или 6 месяцев.Каждая коробка содержала 125 образцов (30 из каждой экспериментальной группы и 5 из группы положительного контроля).

Культивирование микробов

По истечении указанного периода хранения пакет перед открытием проверяли на наличие повреждений барьера. Фильтровальную бумагу удалили в асептических условиях и инкубировали в бульоне Brain Heart Infusion (BHI) (Becton Dickinson, Мэриленд, США) при 37 ° C в течение до 2 недель. Мутность среды указала на микробное загрязнение.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Физический мониторинг во время процесса стерилизации показал, что требуемые условия были соблюдены, т.е.е., температура достигала 121 ° C, а давление составляло 15 фунтов на квадратный дюйм в каждом цикле стерилизации. На каждой упаковке были проверены как внутренние, так и внешние химические индикаторы, и все они показали изменение цвета, указывающее на правильное функционирование автоклавной машины. Биологический мониторинг с помощью теста на споры также показал отрицательный рост во всех образцах, что указывает на стерильность внутри автоклава.

Вся фильтровальная бумага, извлеченная из новых пакетов, а также пакеты, повторно стерилизованные 1 раз, 3 и 5 раз, не показали микробного загрязнения после хранения в закрытой среде в течение до 6 месяцев [].Группа отрицательного контроля представляла собой новый пакет, стерилизованный в тот же день, когда проводилось культивирование микробов группы положительного контроля и экспериментальных групп, без какого-либо хранения. Это был золотой стандарт целостности дипломатической почты. Все пакеты в группе отрицательного контроля не показали микробного загрязнения. Все образцы в группе положительного контроля (намеренно поврежденные пакеты) показали микробное заражение при каждом хранении. В основном наблюдался положительный рост микробов (90.3% всех положительных контрольных образцов) в течение 24 часов после инкубации, и все образцы показали положительные результаты в течение 8 дней после культивирования [].

Таблица 1

Результаты на микробных культурах из новой, повторно стерилизованной и контрольной групп

Распределение по времени для положительных микробных культур из положительной контрольной группы ( n = 280)

ОБСУЖДЕНИЕ

Повторно стерилизованные бумажные / пластиковые пакеты могут поддерживать стерильность после не менее 6 раз стерилизации паром и до 6 месяцев хранения в закрытых помещениях.Это указывает на то, что повторная стерилизация не является фактором, способствующим ухудшению барьерной эффективности бумажных / пластиковых пакетов. Для повторного использования пакета необходимо тщательно осмотреть использованный пакет как со стороны бумаги, так и со стороны пластика, а также по краям запечатывания на предмет повреждений, разрывов или дырок. Участки сломанной пломбы из-за открытия отслаивания или любых повреждений вырезаются, и повторная герметизация выполняется на новом неповрежденном месте. На практике повторно стерилизовать можно только неповрежденный пакет с достаточным пространством для упаковки и повторного запечатывания; таким образом, пакет будет меньше после каждого цикла стерилизации.Однако это исследование было разработано для изучения барьерной эффективности бумажных / пластиковых пакетов в поддержании стерильности после повторной стерилизации в идеальном состоянии. Таким образом, вместо медицинского / стоматологического оборудования применялась фильтровальная бумага, чтобы исключить возможность повреждения целостности мешочка острыми предметами.

Предыдущее исследование повторной стерилизации бумажных / пластиковых пакетов, проведенное Palananthana et al . использовали проволоку из нержавеющей стали, упакованную в пакеты, и определили их стерильность после повторной стерилизации 1–5 раз и хранения в закрытом шкафу в течение 4 месяцев.[ ¹² ] Результаты показали, что 1,33% контаминации в группе, подвергшейся однократной повторной стерилизации при сроке хранения 2 месяца, не было обнаружено во всех других экспериментальных группах (2, 3, 4 или 5 циклов повторной стерилизации и 3–4 месяца при хранении). хранение), а также новую группу сумок. Однако группы отрицательного контроля для сравнения результатов не было. Результаты были неоднозначными, поскольку пакеты, в которых было обнаружено загрязнение, были пакетами с меньшим количеством циклов стерилизации (однократная повторная стерилизация) и более коротким сроком хранения (2 месяца), в то время как пакеты с большим количеством циклов повторной стерилизации (повторная стерилизация в 5 раз) и более длительным сроком хранения ( 4 месяца) все еще может сохранять бесплодие.Наше исследование обнаружило микробное загрязнение во всех образцах из группы положительного контроля. Со всеми пакетами в группе положительного контроля обращались так же, как с пакетами из экспериментальных групп, и в перчатках, которые носили во время переноса. Это указывает на то, что загрязнение может происходить только из окружающей среды и что целостность барьера является очень важным фактором в поддержании стерильности упаковки.

Исследования срока годности новых пакетов из бумаги / пластика показали, что уровень загрязнения составляет от 0% до 1.6%. [ ^{6 , 13 , 14 , 15} ] При низких уровнях загрязнения мы рассчитали размер выборки как 6720, что было значительно больше, чем в предыдущих исследованиях, и с отрицательными и положительными контролями, чтобы гарантировать достаточное количество шансы потенциального заражения. Во всех исследованиях, в которых было обнаружено загрязнение, оно было связано не со временем, а скорее с событием, поскольку отрицательный контроль (без хранения) также показал загрязнение, существенно не отличавшееся от групп с более длительным сроком хранения (до 1 года).[ ¹³ ] В нашем исследовании контаминация в группе отрицательного контроля отсутствовала. В исследованиях без отрицательного контроля микробное загрязнение также не было связано со временем хранения. [ ⁶ ] Было высказано предположение, что непреднамеренное загрязнение могло произойти во время распаковки и транспортировки медицинского / стоматологического оборудования. [ ¹⁴ ] Аналогично, a Проспективное исследование, в ходе которого периодически проверяли наличие стерилизованных предметов, хранящихся на полках в больничных палатах, не обнаружило заражения в течение 2 лет.[ ¹⁶ ] Действительно, при надлежащих условиях хранения и обращения срок годности стерилизованного оборудования может быть больше, но исследования не проводились за пределами двухлетнего периода. Из этих результатов можно сделать вывод, что микробное загрязнение не зависит от времени хранения или количества циклов стерилизации.

В этом исследовании использовался бульон BHI для микробной культуры для изучения потенциального загрязнения. Эта среда имеет в основном те же ингредиенты, что и соевый бульон триптиказы, использованный в других исследованиях.[ ^{5 , 13 , 14 , 15 , 16} ] Его можно использовать для культивирования как аэробных, так и факультативно анаэробных бактерий. [ ¹⁷ ] Мы отслеживали результаты культивирования в течение 2 недель, в течение которых было похоже на период времени, использованный в предыдущих исследованиях, поскольку положительные культуры все еще могут наблюдаться в течение 2^{-й недели} . [ ¹³ ] Наиболее положительный рост микробов произошел в течение 24 часов, аналогично временным рамкам, предложенным в руководстве, [ ¹⁷ ], и все образцы были признаны положительными в течение 8 дней после культивирования.В этом случае BHI оказался подходящим для культивирования с микробным загрязнением, поскольку время культивирования было меньше, чем при использовании соевого бульона с триптиказой, и все образцы положительного контроля неизменно демонстрировали достоверный рост микробов.

Условия повторной стерилизации бумажных / пластиковых пакетов в этом исследовании имитировали идеальные условия, при которых процесс стерилизации повторялся немедленно с минимальным обращением. На практике повторно используемые пакеты имеют более высокий риск повреждения стерильности пакетов из-за события, связанного с распаковкой, переупаковкой, обработкой и перемещением пакетов и оборудования, а также из-за человеческой ошибки.Это исследование смогло выявить только неповрежденную барьерную эффективность этих пакетов после повторной стерилизации. Исследование фактической практики повторного использования пакетов, содержащих медицинское / стоматологическое оборудование, необходимо для подтверждения этих результатов, прежде чем можно будет подтвердить безопасность повторно используемых пакетов.

ВЫВОДЫ

Повторная стерилизация бумажных / пластиковых пакетов до 5 раз и хранение в закрытой среде до 6 месяцев не нарушили барьерную целостность пакетов.

Финансовая поддержка и спонсорство

Это исследование финансировалось стоматологическим факультетом Университета Махидол, Бангкок, Таиланд.

Конфликт интересов

Конфликта интересов нет.

СПРАВОЧНАЯ ИНФОРМАЦИЯ

Тепловая стерилизация — обзор

4.2.1 Стерилизация сухим теплом

Стерилизация сухим теплом — один из старейших методов стерилизации со времен древних египтян, но он редко применяется в производстве медицинского оборудования. , за исключением фармацевтической области, где он используется как часть асептической обработки.

Первоначально он использовался для консервирования и стерилизации предметов, чувствительных к влаге. Сегодня он используется для стерилизации таких предметов, как порошки, стекло, неводные материалы, электроника и силиконовые протезы. В больницах высокотемпературное сухое тепло (например, 150–180 ° C) следует использовать только для материалов, которые могут быть повреждены паром или непроницаемы для пара. Сухое тепло по-прежнему используется при стерилизации стоматологических инструментов для минимизации коррозии острых предметов и депирогенизации пирогенов.В последнее время он был использован как предпочтительный метод стерилизации космических аппаратов в Соединенных Штатах. Вместо этого русские использовали газовую смесь ЭО и бромистого метила. С его дальнейшим развитием для стерилизации компонентов космических кораблей и т. Д. Стерилизация сухим жаром стала более полезной. В результате его используют для стерилизации силиконовых протезов (например, молочных желез).

Классически сухой жар означал очень высокие температуры, разрушающие многие предметы. В фармацевтической промышленности он используется для депирогената или инактивации пирогенов (обычно клеточных стенок мертвых микробов, которые могут вызывать у пациента фебрильную реакцию).

Сухой нагрев требует значительно больше времени или более высокой температуры для обработки и инактивации устойчивых микробов (например, спор) на продуктах, чем пар. Следовательно, стерилизация сухим жаром обычно применяется для материалов и продуктов, которые не могут выдерживать пар (например, стекло, порошки и депирогенизацию) или проникать паром (например, силикон и протезы).

Стерилизация сухим жаром (таблица 4.1) так же проста, как запекание в духовке. Стерилизация сухим жаром зависит от времени и температуры.При сухом нагреве наилучшая стерилизация происходит при повышенной температуре (например, 105–190 ° C) и в условиях обезвоживания. Типичный сухой нагрев (160–180 ° C) — самый простой и наименее затратный метод с меньшими параметрами и отличной проникающей способностью; однако имеет долгую выдержку:

Таблица 4.1. Стерилизация сухим жаром

•

6 мин. : 190 ° C

•

30 мин: 180 ° C

•

60 мин: 170 ° C

•

120 мин: 160 ° C

•

150 мин: 150 ° C

•

Ночью: 105–135 ° C

Помимо длительного времени выдержки, он имеет медленную скорость проникновения тепла.Новый инфракрасный порт может стерилизоваться быстрее, но не обязательно одобрен для использования в больницах. Однако инфракрасное излучение используется в фармацевтической промышленности для депирогенизации и стерилизации стеклянных флаконов.

При более низкой температуре (например, 105–135 ° C) больше материалов и устройств становятся совместимыми. Более низкие температуры стерилизации (например, <105 ° C) были продемонстрированы при значении D. D-значение определяется как время, необходимое для уничтожения одного логарифма или 90% популяции при данной температуре. Время, чтобы убить 90% популяции Bacillus atrophaeus при 120 ° C, может составлять 1 час.Время также будет варьироваться в зависимости от истории спор, окружающей среды, субстрата популяции и потребностей продукта в теплопроницаемости. Значение D (рис. 4.1) является основой кинетики гибели микробов.

4.1. Кинетика микробной инактивации — показатель смертности (D-значение).

Классическим методом является метод Стумбо, а именно:

D-значение = время воздействия или стерилизацияLogN0 − LogNT

, где N ₀ — начальное количество организмов (бионагрузка или популяция биологического индикатора), а N _T — это исходное количество организмов. количество выживших после времени воздействия или дозы стерилизующего средства.

Бионагрузка — это оценка того, что находится на стерилизуемом продукте или предмете. Биологический индикатор (BI) представляет собой раствор или носитель, состоящий из известной концентрации (популяции) спор (обычно), который обладает высокой устойчивостью к методу стерилизации (например, паром, ЭО и сухим жаром) и бросает ему вызов.

Два типичных коммерческих стерилизатора сухого нагрева (рис. 4.2) выдерживают время воздействия, например, 6 мин при 190 ° C и 30–120 мин при 160 ° C и 180 ° C. При самых высоких температурах (например,г., 330 ° C) сухой жар становится практически «абсолютным методом» и самой быстрой (1,15 с) стерилизацией (Rhodes, 1966, ¹ ) за счет разложения всех органических веществ до углерода. При минимально возможных температурах (37 ° C или ниже) сухой жар может потребовать наибольшего времени воздействия (~ 45 дней D-значение) практически из любого метода, чтобы вызвать стерилизационную инактивацию (12 × 45 дней = 540 дней). Теоретически при 0 ° C, при сильном обезвоживании, значение D сухого тепла будет около четырех лет. (Молин, 1977 ² ).Для достижения чрезмерной стерилизации (например, 12 × D-значение) потребуется ~ 48 лет.

4.2. Два коммерческих стерилизатора сухого нагрева: (a) самый быстрый стерилизатор сухого нагрева Cox (6 минут без упаковки при температуре 375 ° F (190 ° C); 12 минут в упаковке) и (b) стерилизатор сухого нагрева Wayne S1000 (стандартный 160–180). ° C духовка для инструментов).

Стерилизация сухим теплом, однако, происходит в основном путем обезвоживания и окисления, но при температурах, как правило, таких же или более высоких, чем пар, что ограничивает типы термочувствительных материалов и полимеров, если нет готовности стерилизовать при более низких температурах. и обрабатывать в течение очень длительного времени в условиях обезвоживания.Таким образом, при самой высокой температуре он мог практически разрушить все (и даже закалить металлы), что соприкасалось с ним; однако на теоретически самом низком уровне для достижения стерильности потребуется слишком много времени.

Существует химический паровой стерилизатор сухого нагрева, который можно стерилизовать за 20 минут при 132 ° C. Однако его влияние на полимеры неизвестно. Он стерилизует металлические инструменты без потускнения, ржавчины или коррозии, как при стерилизации паром, и намного быстрее, чем стандартная стерилизация сухим жаром только нагретым воздухом.

Лабораторные методы

Часть G: Методы и материалы

A. Стерильные методы

Стерильная техника — дело относительное. Необходимые меры предосторожности зависят от экспериментальной ситуации, включая используемые питательные среды, конкурентоспособные способности экспериментальный организм, продолжительность эксперимента и предполагаемое использование культуры.Для В этих экспериментах наиболее серьезной проблемой загрязнения является плесень. Растут многие распространенные плесени хорошо на дрожжевой среде и эффективно конкурируют, перерастая чашки и скрывая эти дрожжи которым удается расти. Бактерии представляют меньшую проблему, поскольку большинство из них плохо растут на эти среды и, имея небольшой опыт, можно легко отличить их от дрожжей. Другие штаммы дрожжей могут быть губительными загрязнителями, если они останутся незамеченными. В частности, красные дрожжи, которые иногда появление может сбивать с толку, но отличается от наших красных дрожжей, потому что не требует аденина.

Однако, в отличие от краткосрочных экспериментов, стерилизующие среды должны быть достаточно строгими. потому что хранение дает достаточно времени для развития даже медленно растущих загрязняющих веществ. У нас есть на основании своего опыта пришли к выводу, что хранение носителей в холоде на самом деле контрпродуктивно. Оно делает не предотвращает заражение, но замедляет его рост. Следовательно, загрязнение может остаться незамеченным. пока культуры не инкубируются. Намного лучше хранить носители при комнатной температуре и обнаруживать загрязнение до использования среды.

(1) Стерилизация влажным теплом

Влажное тепло, создаваемое автоклавом или скороваркой, является эффективным способом стерилизации большинство материалов. При давлении на 15 фунтов на квадратный дюйм выше атмосферного, вода достигает температуры примерно 121 ° C, прежде чем он закипит. Большинство материалов эффективно стерилизуются за 15 минут. воздействие этой температуры. Если автоклав недоступен, обычный бытовой напорный плита эффективно стерилизует расходные материалы небольшими партиями.

(2) Стерилизация сухим жаром

Сухие материалы, такие как стекло и металл, можно стерилизовать в духовке, но это требует более высокой температура (160 ° C) и более длительное время (не менее 2 часов), чем в автоклаве. Это наиболее практично для стеклянной посуды, когда доступна духовка, управляемая автоматическим таймером, так что стерилизация и охлаждение может произойти в течение ночи. Использование одноразовой предварительно стерилизованной пластиковой посуды делает печь менее удобной. важный.

(3) Стерилизация пламенем

Пламя газовой горелки эффективно стерилизует небольшие стеклянные или металлические предметы, такие как инокуляционные петли, но следует избегать «поджаривания» дрожжей при контакте с предметами, нагретыми в пламени. Окуните стеклянные разбрасыватели в спирт, а затем воспользуйтесь пламенем, чтобы поджечь спирт. Поместите металлические инструменты, например как петли в пламени, пока они не станут докрасна. Охладите горячие инструменты, прикоснувшись ими к агару или внутри стерильной стеклянной пробирки.Однако, поскольку пламя опасно, этот метод можно и нужно по возможности избегать. Мы обнаружили, что пламя действительно необходимо только для стерилизации посевные петли и небольшие инструменты. Мы не смогли продемонстрировать какую-либо ценность в сжигание отверстий пробирок, бутылок или колб в этих экспериментах.

(4) Стерилизация спиртом

Во многих экспериментальных процедурах наиболее эффективный способ стерилизации предметов — это спирт этиловый.Либо 95%, либо 70% подойдут. Последний на самом деле более эффективен, но первый более эффективен. часто удобнее. Конечно, спирт должен испариться или сгореть. прежде, чем объект будет использован в контакте с дрожжами. Используйте пламя, чтобы сжечь спирт, свечу обычно дешевле и безопаснее, чем газовая горелка. Алкоголь больше, чем тепло, стерилизации, поэтому просто «зажгите» спирт, чтобы свести к минимуму нагревание и ускорить процесс. Также протрите скамейку со спиртом перед началом эксперимента по удалению заплесневелой пыли, наиболее общий источник загрязнения.Если ваша кожа не особенно чувствительна, протрите руки тоже небольшое количество алкоголя.

(5) Обеспечение стерильности вещей стерильными

Наиболее частым источником загрязнения во время эксперимента является пыль от скамейки, с воздуха и от людей. Это диктует несколько очевидных принципов:
1) Сохраняйте вещи покрыты как можно больше.
2) Не трогайте ничего, что может соприкасаться с культуру, и если вы все-таки прикоснетесь к ней, стерилизуйте ее еще раз перед использованием.
3) Протрите поверхность вокруг эксперимента с алкоголем и минимизировать турбулентность воздуха.
4) Избегайте разговоров, пения, свист, кашель или чихание в направлении вещей, которые должны быть стерильными. Длинные волосы, если нет привязанный назад, может быть источником заражения.
5) Поддерживайте подходящее место для подготовки, хранение и использование стерильных сред. К сожалению, домашние растения, животные и другие материалы, такие как Среда для дрозофилы, обычно встречающаяся в классах биологии, является обильным источником плесени и плесени. следует держать подальше от зоны стерильных процедур.

(6) Изучите свое загрязнение, чтобы его избежать. Время

Если некоторые из ваших чашек с агаром загрязнены, вы часто можете сказать, исследуя табличка, как произошло заражение. Если загрязняющие вещества попадают в агар, Загрязнение, вероятно, было залито средой. Если загрязнение находится под агаром, могли находиться в посуде до того, как ее налили, или в нее вошли, когда крышка открывалась, чтобы залить.Если загрязнение находится сверху, оно могло появиться до того, как крышка была закрыта после заливки. открывая крышку, чтобы удалить конденсат, или пока пластина была делается прививка.

(7) Приспосабливайте свои методы к своим Потребности

Соответствующая стерильная техника важна для успешных микробиологических экспериментов, но чрезмерные меры предосторожности могут серьезно отвлечь внимание. Дрожжи и бактерии требуют разных методов из тканевой культуры.Дрожжи быстро растут, опережая большинство вещей, за исключением нескольких нитчатых (нечеткие) грибы и некоторые бактерии. Эксперименты могут стать загрязненными и все равно не потеряться, если студенты используют дрожжи, потому что дрожжи будут расти достаточно хорошо, несмотря на заражение, что результаты эксперимента можно прочитать через оскорбительный рост. Поэтому используйте как можно больше осторожность при приготовлении и заливке СМИ.

D. Рост Медиа

В большинстве экспериментов в этом руководстве используются один или два из следующих типов средств массовой информации:
1) питательно полноценная среда, содержащая субоптимальное количество аденина (YED),
2) питательная полноценная среда, содержащая избыток аденина (YEAD),
3) а химически определенная среда без аденина (MV),
4) химически определенная среда с аденин (MV + Ade),
5) среда споруляции (YEKAC),
6) среда, используемая для идентифицировать маленькие мутанты (PETITE) и
7) богатую среду, используемую для хранения штаммов дрожжей (YEPAD).

Мы используем среды, приготовленные из имеющихся в продаже ингредиентов. Небольшие дополнительные расходы Использование этих ингредиентов более чем компенсируется их однородностью и надежностью. В экономия, которую можно получить при использовании «домашних» ингредиентов, меньше, чем можно было бы ожидать. потому что мы еще не нашли замену самому дорогому ингредиенту — агару. Несмотря на то что общие источники, такие как различные виды овощных соков, могут обеспечить большинство других ингредиентов, мы пришли к выводу, что жертвовать воспроизводимостью неоправданно.

Среда YED (дрожжевой экстракт + декстроза) будет нашей стандартной питательной средой. Это называется «сложная» среда, потому что она сделана из натуральных ингредиентов (дрожжей) и их точного химического состава. состав не известен. Он содержит все, что есть в дрожжах, включая, конечно, аденин. это также «законченный» носитель. Мутанты, требующие красного аденина, хорошо растут на этой среде и развивают характерный красный пигмент.

Среда YEAD (дрожжевой экстракт + аденин + декстроза) содержит те же ингредиенты, что и YED, но добавлен избыток аденина.Мутанты, требующие красного аденина, хорошо растут на этой среде, и будет не развивают характерный красный пигмент.

Среда YEPAD (дрожжевой экстракт + пептон + аденин + декстроза) содержит те же ингредиенты как YEAD, но с добавлением пептона. Это очень богатая среда, используемая для хранения штаммов дрожжей.

Среда MV (Minimal plus Vitamins) — это среда определенного химического состава, что означает, что она состоит из минимум чистых химических ингредиентов, необходимых для поддержания роста дрожжей дикого типа.Мы будет использовать MV, когда нам нужна среда, не содержащая аденина.

MV + Ade medium (Minimal plus Vitamins + аденин) содержит те же ингредиенты, что и MV, но добавлен избыток аденина.

YEKAC (дрожжевой экстракт плюс ацетат калия) вызывает образование спор диплоидных дрожжей и пройти мейоз. Это несбалансированное питание, поэтому рост будет очень незначительным.

Среда PETITE содержит глицерин в качестве источника углерода и используется для идентификации небольших колоний. мутанты.Маленькие клетки не будут расти на этой среде.

Рецепты сред для выращивания агара

Если вы используете предварительно расфасованную смесь, следуйте инструкциям на упаковке. Если ты Для взвешивания сухих ингредиентов используйте следующие рецепты. Приведены рецепты приготовления 100 миллилитров. Если вы хотите заработать больше, просто умножьте количество, чтобы получить объем, который вы хотеть. Пример: чтобы получить 500 миллилитров, умножьте каждый ингредиент на 5.Не кладите больше 600 миллилитры в колбе на 1000 миллилитров. Если вы наполните емкости слишком полными, они могут выкипеть во время процесс стерилизации. Для того, чтобы налить одну стандартную 100 x Пластина 15 мм. (Жидкие среды могут быть приготовлены по этим рецептам без агара.)

Декстрозная среда с дрожжевым экстрактом (YED):

1 грамм дрожжевого экстракта
2 грамма безводной декстрозы (глюкозы)
2 грамма Агара (агар-агар; гумми-агар)
100 мл воды

Дрожжевой экстракт аденин-декстрозной среды (YEAD):

1 грамм дрожжевого экстракта
2 грамма безводной декстрозы (глюкозы)
2 грамма агара (агар-агар; гумми-агар)
8 мл основного раствора аденина
92 мл воды

Дрожжевой экстракт пептон аденин декстроза среда (YEPAD):

1 грамм дрожжевого экстракта
2 грамма пептона
2 грамма безводной декстрозы (глюкозы)
2 грамма агара (агар-агар; гумми-агар)
8 мл основного раствора аденина
92 мл воды

PETITE Средний:

1 грамм дрожжевого экстракта
0.025 грамм декстрозы (глюкозы) безводной
2,4 мл глицерина
2 грамма агара (агар-агар; гумми-агар)
98 мл воды

Минимальный с витаминами (МВ):

0,15 г дрожжевой азотной основы без аминокислот и сульфата аммония
0,52 г сульфата аммония
2 грамма безводной декстрозы (глюкозы)
2 грамма агара (агар-агар; гумми-агар)
100 мл воды

Минимальная среда плюс аденин (MV + ade):

0.15 грамм дрожжевой азотной основы без аминокислот и сульфата аммония
0,52 г сульфата аммония
2,0 г безводной декстрозы (глюкозы)
2,0 г Агара (агар-агар; гумми-агар)
8,0 мл основного раствора аденина
92 мл воды

Среда для споруляции (YEKAC):

1 грамм ацетата калия
0.25 грамм дрожжевого экстракта
2 грамма агара (агар-агар; гумми-агар)
100 мл воды

Базовый раствор аденина

400 мг аденина в 400 мл воды (1 мг / мл)
Хранить при комнатной температуре.
Используйте 2 мл основного раствора на 100 мл среды; уменьшить воду добавлен в среду по 2 мл.

Диски для промокательной бумаги с аденином

1.25 грамм аденина
150 мл дистиллированной воды
дискеты для промокательной бумаги арт
Добавьте аденин в дистиллированную воду в достаточно большом стакане, чтобы раствор не закипал. над. Варить пять минут. Добавьте промокательные бумажные диски и прокипятите еще пять минут. Снимаем диски стерильными щипцами в стерильный закрытый контейнер, например чашку Петри. Поместите их в один слой и дайте им высохнуть в течение нескольких дней.

Э.Стерильная вода

Для многих краткосрочных экспериментов воду можно «стерилизовать» кипячением.
1) налейте воду в неплотно закрытую емкость,
2) поместите емкость в емкость с кипяток в течение 15 минут,
3) после того, как он остынет, закройте емкость для воды крышкой.

Вероятно, лучший способ приготовить стерильную воду — это поставить неплотно прикрытую воду емкости в автоклаве или скороварке, а затем стерилизовать воду под тем же условия, используемые для питательных сред.

F. Температура инкубации и скорость роста

Оптимальная температура роста для этих штаммов составляет примерно 30 ° C, но они будут вполне удовлетворительно растут в гораздо более широком диапазоне. Все эти эксперименты можно провести в комфортная комнатная температура, но дрожжи переносят практически любую температуру, которую могут люди. Однако температура повлияет на скорость роста. При более низких температурах клетки будут расти медленнее, и скорость должна определяться экспериментально.Время инкубации оценивается в эти эксперименты основаны на инкубации при температурах в пределах одного или двух градусов от 30 ° C.

Фактически, можно замедлить дрожжи, охладив их, чтобы эксперименты соответствовали классу. расписания. Просто охладите или просто охладите тарелки на разных стадиях, чтобы замедлить рост. Однако имейте в виду, что после того, как культура была заморожена, может наступить период задержки. за несколько часов до того, как он снова начнет расти. Конечно, если он достиг стационарной фазы, он не будет расти дальше при любой температуре.

Штаммы дрожжей можно хранить в течение длительного времени в холодильнике при температуры чуть выше нуля. Некоторые штаммы будут продолжать расти, хотя и очень медленно, при эти температуры, но большинство из них остаются жизнеспособными в течение недель или месяцев, а некоторые — годами.

Следует избегать температур выше 30 ° C. Хотя клетки будут расти при более высоких При высоких температурах в них накапливаются нежелательные маленькие мутации, и спороношение сильно подавляется.Красный пигмент у мутантов аденина также подавляется при более высоких температурах. Безопаснее всего инкубируйте спорулирующие культуры при комфортной комнатной температуре.

Инкубируйте культуры в темноте или при слабом освещении. удобный. Хотя это и не критично, длительное пребывание в обычной комнате свет или более яркий свет снизят жизнеспособность клеток, которые содержат красный пигмент. Чувствительный к УФ-излучению штамм G948-1C / U не должен имеют длительное воздействие источников света.

Для оптимального роста и развития красного пигмента чашки должны быть аэробными. Мы инкубируйте чашки в открытых пластиковых пакетах для хранения продуктов. Достаточно кислорода, когда пакеты открыты для поддержки аэробного дыхания. Пластиковые пакеты предохраняют тарелки от слишком быстрого высыхания, защищают их от загрязнений и облегчить их переноску, не пролив.

G. Использование зубочисток и петель для вакцинации

Для большинства целей самый простой способ переместить дрожжи из одного места в другое на агаре. средний — стерильной зубочисткой.Плоскую зубочистку использовать проще, чем круглую. Заостренный конец полезен для отбора образцов из отдельных колоний или для создания небольших пятен. или полосы. Плоский конец хорошо подходит для распределения дрожжей, для их разметки, чтобы изолировать отдельные колонии и для смешивания. Зубочистки стерильны прямо из коробки, если в коробке нет был загрязнен. Просто прорежьте один угол, чтобы сделать небольшое отверстие (от 1/4 до 1/2 дюйма в поперечнике). а коробка будет служить дозатором.Зубочистки в коробке направлены в обе стороны, но Вы можете легко выбрать желаемый конец для любой задачи. Конечно, нужно позаботиться о том, чтобы обращаться с каждая зубочистка только за кончик, который не касается дрожжей или среды.

Зубочистка — альтернатива традиционной петле для посева, которая доступна коммерчески, даже в платине. Мы делаем наши собственные петли для посева из куска от 6 до 8 дюймов. латунный пруток (используемый для пайки) и нихромовая проволока.Просверлите небольшое отверстие возле конца стержня, чтобы закрепите проволоку, вставьте конец проволоки в отверстие, намотайте несколько витков вокруг стержня и оставьте один-два дюйма проволоки прямыми. В конце прямого участка сформируйте петлю с парой плоскогубцы. Обжигайте провод в бунзеновской горелке, пока он не загорится красным, чтобы стерилизовать его перед каждым используйте и, конечно же, дайте ему остыть, прежде чем он коснется (или поджарится) дрожжей. Прикосновение к агару сразу охлаждает.

ЧАС.Распределяющие ячейки

Есть несколько способов разложить клетки. Они используют различные типы оборудования для дозирования и различные методы перемещения клеток по поверхности агара.
Количественный метод заливки
Этот метод требует подготовки отдельной пробирки для окончательного разбавления для каждого планшета и затем все содержимое пробирки выливается на поверхность агара. Этот метод имеет преимущество в том, что не требуется использование пламени.Его недостаток в том, что он не такой воспроизводимый.

1. Сделайте серию разведений от 1 до 10 суспензий дрожжевых клеток.
2. Перенесите 0,1 мл соответствующей суспензии в стерильную пробирку, содержащую 0,9 мл стерильная вода. Вращайте пробирку, чтобы приостановить клетки, а затем вылейте все содержимое пробирку на поверхность агаровой среды. Наклоните и поверните пластину, чтобы распределить суспензию по поверхности агара.
3. Если есть пятна, которые не покрываются, используйте стерильную зубочистку, чтобы размазать подвешивание над непокрытыми участками.

Суспензию необходимо дать впитаться в агар, прежде чем чашки будут подвергнуты воздействию экспериментальное лечение. Чтобы ускорить процесс, сделайте чашки с агаром несколько дней в заранее и дайте им немного подсохнуть, прежде чем заливать дрожжевую суспензию.

В видео-разделе «Последовательное разведение и подсчет жизнеспособных клеток» показан метод заливки.

Количественный метод распределения
Если вам нужны точные данные, лучше использовать альтернативный метод покрытия. Сотовый суспензия аккуратно наносится на поверхность агара, а затем распределяется стерильным разбрасыватель. Разбрасыватели бывают двух типов:

Разбрасыватель скрепок без пламени
Вы можете легко сделать недорогой разбрасыватель многоразового использования, выпрямив два изгиба в большом канцелярская скрепка, оставляя конец в форме шпильки для растягивания и прямую ручку под прямым углом к ​​нему.Вы можете стерилизовать несколько разбрасывателей вместе в закрытых мензурках или завернутых в фольгу или бумагу.
Распылитель пламенного стекла
Если у вас есть оборудование и навыки для работы со стеклянным стержнем, вы можете сделать простой разбрасыватель стекла. нагревая и сгибая один дюйм на конце короткого куска стеклянного стержня. Эти также можно приобрести разбрасыватели.

1. Сделайте серию разведений от 1 до 10 суспензий дрожжевых клеток.
2. Используйте новый наконечник для дозатора 0.1 мл соответствующей суспензии на агаре поверхность. Перед взятием пробы постучите по пробирке. Если вы делаете несколько тарелок Вы можете пипетировать клетки в каждую чашку, используя один и тот же наконечник для пипетки, а затем распределить их не поджигая распределитель между каждой пластиной.
3. Стерилизуйте разбрасыватель в 95% этаноле, а затем пропустите разбрасыватель через пламя, чтобы зажечь спирт. Осторожно удерживайте разбрасыватель, пока весь спирт на разбрасывателе не полностью горит.Использование пламени алкоголя — опасный шаг, требующий осторожности. и тщательный контроль со стороны учителя.
4. Охладите разбрасыватель, прикоснувшись им к агару. Используйте плоскую сторону, чтобы разложить подвешивание над поверхностью; затем используйте изогнутую часть расширителя, чтобы сделать перекрывающиеся штрихи. Поверните тарелку на 90 градусов и повторите процесс изготовления. перекрывающиеся штрихи. Крышку можно держать над пластиной, чтобы минимизировать загрязнение. Избегайте распространения суспензии до края, где она может стекать между агаром. и сторона чашки Петри.

В разделе видео «Использование дрожжей для измерения солнечного УФ-излучения» показано покрытие разбрасывателя из пламенного стекла. метод.

Метод качественной заливки для производства газонов из ячеек
Этот метод обеспечивает густой равномерный рост клеток (газон) по поверхности агара. пластина. Это быстрый метод, который полезен для множества качественных экспериментов.

1. Сделайте мутную суспензию дрожжевых клеток.
2.Нанести пипеткой 1,0 мл суспензии на поверхность агаризованной среды. Наклоните и поверните планшет, чтобы равномерно распределить суспензию по поверхности агара.
3. Если есть пятна, которые не покрываются, используйте стерильную зубочистку, чтобы размазать подвешивание над непокрытыми участками.

Как и в методе количественного нанесения покрытия, суспензия должна быть пропитана . агар перед экспериментальной обработкой планшетов.Если вы сделаете чашки с агаром за несколько дней и дайте им немного подсохнуть, прежде чем заливать дрожжевую суспензию. ускорить процесс.

Видео раздел Влияние солнечного УФ-излучения на элементы иллюстрирует метод заливки покрытия для лужайка.

I. Автоматические микропипетки, серологические пипетки и Одноразовые пипетки с шариками

Автоматические дозаторы — это рабочие лошадки современной молекулярной биологии и микробиология.Они быстрые и точные и позволяют сэкономить много времени и нервов. В Эксперименты в этом руководстве часто требуют использования дозатора 0,1 мл. Хотя они относительно дорогие, они делают работу настолько быстрой, что ее могут легко разделить несколько студентов или лабораторию группы. Вы будете использовать его для серийных разведений и для посева клеток на агаре. Стерильные наконечники расфасованы в многоразовые пластиковые диспенсеры. Практикуйтесь в использовании дозатора с водой, пока не почувствуете комфортно с этим.(Если автоматические микропипетки недоступны, их можно заменить одноразовые пипетки с шариками, серологические пипетки или градуированные капиллярные трубки)

1. Плотно прижмите маленький конец дозатора к открытому концу наконечника, пока наконечник все еще в дозаторе.
2. Чтобы заполнить его, медленно нажимайте на поршень до тех пор, пока не почувствуете сопротивление, но не до упора. возможный. Погрузите наконечник в раствор, а затем медленно отпустите поршень.Если любые капли налипают на кончик, протрите их краем емкости.
3. Поместите наконечник в жидкость в пробирке, в которую вы вводите пипетку, и медленно нажмите. поршень. На этот раз нажмите как можно глубже, чтобы удалить весь образец. Выньте кончик дозатора из раствора, отпустите поршень и выбросьте Подсказка.

Серологические пипетки и пипеточные насосы могут использоваться вместо автоматических пипеток.Эти пипетки дадут очень точные измерения объема. Возможна покупка предстерилизованных серологические пипцы нескольких размеров. У вас должен быть набор дозаторных насосов, доступных для учащихся. использовать с этими пипетками. Помните, что никогда не следует набирать жидкость ртом. пипетка. Даже стерильной воды!

Одноразовые пипетки с луковицами также подходят для большинства экспериментов в этом справочнике. Три капли из пипетки объемом один миллилитр примерно равны 0.1 мл. Громкость измерения не такие точные, но эти пипетки дешевы и не требуют использования пипетки. насосы. Эти пипетки также можно приобрести предварительно стерилизованными и индивидуально упакованными. В обертки предварительно стерилизованных пипеток служат удобным стерильным держателем для пипеток во время Экспериментальная процедура.

J. Создание субкультуры дрожжей

Питательные вещества для дрожжей могут поступать в твердую или жидкую среду.Когда дрожжи штаммы поступают от поставщика, они обычно выращиваются на скошенном агаре. Если вы держите эти уклоны плотно закрытые и охлажденные, их можно хранить до одного года. Меньшие наклоны позволяют использовать зубочистки, чтобы переместить дрожжи. Лучше всего иметь свежие культуры для ваших экспериментов. Итак, день перед тем, как вы собираетесь использовать дрожжи, перенесите небольшое количество клеток из исходной культуры в свежие. средний (обычно ДА). Вы можете использовать обожженную петлю для переноса клеток, но стерильная зубочистка не помешает. обычно проще.Прикоснитесь зубочисткой к ячейкам на скосе; вам не нужно переносить много ячеек. Сделайте полосу из клеток на поверхности агара; старайтесь не выдавливать поверхность агара. Этот Процедура выращивания свежих дрожжей называется субкультивированием. Вы должны субкультивировать не менее 12 часов прежде чем вы собираетесь использовать дрожжи.

Иногда посевы будут отправляться из центров по хранению дрожжей на бумажных носителях. Сделать свежий субкультура: стерильно откройте фольгу и с помощью стерильных пинцетов поместите небольшой квадрат молочной бумаги. на стерильной пластине YED с агаром.Если вы протрите агар бумагой несколько раз, вы получите использовать отдельные колонии, и на месте размещения бумаги вырастет большое пятно клеток. Это займет от 3 до 5 дней для многих штаммов, выращенных таким образом, чтобы вырасти до подходящего размера. Культур отправлено таким образом они менее уязвимы к неблагоприятным погодным условиям и длительному времени в пути.

K. Изоляция одиночных колоний

Многие эксперименты требуют выращивания колоний из изолированных одиночных клеток.Это легко осуществляется штриховкой культур на пластине с агаром плоским концом зубочистки. В цель метода состоит в том, чтобы последовательно разбавить клетки на поверхности агара, перекрывая друг друга. полосы, пока отдельные клетки не будут разделены или распределены с образованием изолированных одиночных колоний. Фигура 11> ниже проиллюстрирована техника, которую вы должны практиковать, пока не достигнете совершенства.

Рисунок 11: Изоляция одиночных колоний

Первым шагом является сделайте одиночную короткую полоску клеток (около 2 см длиной) возле края агара в чашке Петри.Новой зубочисткой нарисуйте вторую полосу внахлест под углом примерно 15 градусов к первый, перетаскивая ячейки из первой полосы на свежий агар. Сделайте еще несколько параллельных полос с та же зубочистка. Затем возьмите новую зубочистку и повторить процесс, начиная с конца последнего полоса. Повторяйте эту последовательность, пока вся тарелка был покрыт. Поскольку популяция клеток, производится из одного родительская клетка является клоном, это процесс клонирования дрожжи.Если культура не чиста по какой-либо причине, это обеспечивает метод выделения чистых клонов. В такого же результата можно достичь, используя пламенный и охлаждаемая петля на каждом шаге, где свежая зубочистка использовал. Этот подход более медленный и рискует поджарить клетки.

L. Replica Покрытие

В некоторых экспериментах мы переносим многие культуры из одного вида среды к одному или нескольким другим видам, к определять рост культур требования.Это можно сделать с помощью зубочистки или петли, но если есть очень много штаммов для передачи становится трудоемкий. Простой, быстрый способ — покрытие реплики — сыграло важную роль в развитие микробной генетики и является одним из величайших экономистов всех время. Описанные ниже эксперименты можно обойтись без этой техники, но это интересно делать и стоит Проблема с его настройкой. Даже при скромных эксперименты, усилие хорошее инвестиции в долгосрочной перспективе.

Принцип покрытия реплики что из штампа.

Рисунок 13: Покрытие реплики

Штамп из хлопкового вельвета используется для штамповки копии узора. клеток, растущих на одной пластине, на одну или несколько других пластин. Аппарат состоит из цилиндрический держатель для вельвета, размер которого идеально подходит для дна чашки Петри тарелку и какое-то кольцо, чтобы удерживать вельвет на месте. Для стандартных пластиковых тарелок 10 см подходящий диаметр составляет примерно 3.3 дюйма. Держатель может быть цилиндром из дерева, металла, пластик или любой другой материал, который вы можете изготовить. Это может быть даже баночка с едой на фунт или другая тяжелая цилиндрическая емкость, если дно ровное. (Круг, вырезанный из подноса для мяса из пенопласта, плоская поверхность, чтобы надеть банку с едой) Кольцо для удержания вельвета может быть большим зажимом для шланга, некоторые другой найденный предмет, или даже большая резинка.

Вельвет, конечно, нужно стерилизовать, а недавно разрезанный хлопковый вельвет обычно требует перед стерилизацией удалите ворсинки с помощью куска малярной ленты.Автоклав и сушить тщательно. Мы используем шестидюймовые квадраты, которые складываем и оборачиваем бумагой, автоклавируем, а затем сушим. на настройках вакуума. Если автоклав недоступен, просушите их в теплой духовке или просто дайте им сидеть на прилавке, пока они не высохнут. Чтобы повторно использовать вельветовые квадраты, промойте их в простой воде и повторно стерилизовать. Вместо хлопка можно использовать другие ткани, например, несколько слоев хлопковой марли. вельвет.

Чтобы воспроизвести тарелку, переверните эталонную тарелку с дрожжами поверх вельвета. держатель и плотно прижмите пластину к стерильной тканевой поверхности.Затем медленно очистите тарелку выключить, оставив копию или отпечаток клеточного узора на вельвете. Перенести реплику на вельвета на одну или несколько стерильных тарелок, осторожно прижимая каждую тарелку к вельвету и выскакивает. Можно сделать до 20 копий с одной мастер-пластины, если необходимо. Процедура проиллюстрирована на Рисунке 13.

То, как вы снимаете пластину с вельвета, контролирует количество дрожжи перенесены из вельвета в тарелку или из тарелки в вельвет.Если вы очистите мастер-пластину от вельвета медленными перекатывающими движениями на бархате останется больше дрожжей, чем если бы вы лопнули выключите его быстрым вертикальным движением. Желательно перенести как можно меньше ячеек и при этом возможность видеть отпечаток ячеек на реплике пластины.

М. Оценка количества дрожжевых клеток в Культура

Существует множество способов прямого подсчета клеток, наиболее распространенными из которых является подсчет клеток. камеры для микроскопа или электронных счетчиков частиц.Они имеют мало поучительной ценности в генетика и не подходят для общего использования в классе. Поэтому мы разработали эксперименты, не зависящие от точного подсчета частиц. Когда требуется подсчет клеток, мы определите их по количеству колоний на чашках (см. Разведение и посев Процедуры ).

Однако многие эксперименты требуют приблизительных оценок количества клетки в жидкой суспензии, чтобы получить разумное количество колоний.Для этого вы будет использовать один из самых сложных и чувствительных существующих оптических инструментов: человеческий глаз. С удивительно небольшой практикой вы можете научиться оценивать количество клеток в суспензии. просто посмотрев на это.

Визуальная оценка плотности клеток основана на довольно резком пороге зрения глаза для наблюдения помутнение. При просмотре в стандартной пробирке 13 x 100 мм дрожжевые суспензии менее 1 миллиона клеток на мл не являются заметно мутными.Выше этой пороговой плотности они заметно мутны. К доводя количество клеток в суспензии до тех пор, пока они не станут едва заметными, можно получить суспензию. известной плотности (приблизительно 1 x 106 клеток / мл), а затем использовать серийные разведения для получения других концентрации. (См. Также эксперимент Серийные разведения и подсчет жизнеспособных клеток )

Материалы:

• Стерильные закрытые культуральные пробирки 13 x 100 мл.
• Стерильная вода
• Стерильные пипетки 1 мл (одноразовые пипетки с шариками или серологические пипетки и пипеточный насос)
• Микропипетка и стерильные наконечники (опция)

Процедура:
а.Налейте в пробирку 1-2 мл стерильной воды.
б. Воспользуйтесь охлажденной обожженной инокуляционной петлей или стерильной зубочисткой, чтобы подвесить небольшой количество дрожжей размером с булавочную головку в воде.
c. Тщательно перемешайте суспензию, свободно держа пробирку возле ее верха. между большим и указательным пальцами и ударьте по нему снизу ладонная сторона одного или нескольких пальцев другой руки, создавая завихрение движение.(Ударное движение приближается к жесту, который можно было бы сделать, чтобы помани кого-нибудь сюда.)
Эта суспензия должна содержать приблизительно 1 x 107 клеток / мл, но это плотность трудно судить, поэтому мы разбавим его, прежде чем судить о его плотность.
d. Пипетируйте 0,9 мл стерильной воды в пробирку с помощью стерильной пипетки на 1,0 мл.
е. Разбавьте 0.В эту пробирку поместите 1 мл суспензии ваших клеток и взбейте ее. Сравните это с пробиркой, содержащей стерильную воду. Если пробирка с клетками едва мутная, тогда он содержит почти 1 х 106 клеток / мл.
f. Если пробирка не является заметно мутной, добавьте дополнительные 0,1 мл раствора. подвеска оригинальная, пока она есть. Если вы думаете, что он мутнее предела видимость, затем добавьте еще стерильной воды.Отрегулируйте объемы воды и ячеек пока вы не убедитесь. Следите за добавляемыми объемами, чтобы знать, какое окончательное разбавление вы сделали.

N. Процедуры разбавления и нанесения покрытия

Во многих экспериментах необходимо разложить на пластине примерно известное количество клеток. разрастаться в колонии. Мы используем серийные разведения, делая несколько небольших разведений одно за другим, вместо того, чтобы делать одно большое разведение.Метод экономит материал и позволяет избежать использования больших объемы, которые трудно измерить и стерилизовать.

Материалы:

• Стерильные закрытые культуральные пробирки 13 x 100 мл.
• Стерильная вода
• Стерильные пипетки 1 мл (одноразовые пипетки с шариками или серологические пипетки и пипеточный насос)
• Микропипетка и стерильные наконечники (опционально)
• Скрепка или разбрасыватель стекла: клетки распределены по поверхности агар с разбрасывателями.

Приготовление серийных разведений:
Следующая процедура дает серию разведений, которые различаются в десять раз. Вы сможете использовать эту процедуру для большинства экспериментов, требующих серийного разведения (рисунок 12).

Рисунок 12: Последовательное разбавление-покрытие Стратегия

а. Приготовьте суспензию, содержащую примерно 1 x 106 клеток / мл в стерильном воды, используя процедуру, описанную в Оценка количества дрожжей Клетки в культуре.
б. Пипетка 0,9 мл стерильного воды в каждую из трех пробирки и промаркируйте их. Мы рекомендую сделать диаграмма в вашем блокноте показывая процедуру и смысл твоего этикетки.
c. Ресуспендируйте клетки в оригинальная подвеска. Удалите 0,1 мл микропипеткой и свежим наконечником и перенесите в один из трубки с водой.Затем постучите по трубке, чтобы приостановить клетки.
d. Повторите процедуру последовательно, используя новую пипетку или наконечник для каждой пипетки. оставшиеся пробирки так, чтобы каждая пробирка содержала 1/10 числа ячеек, как Предыдущая. Третье разведение должно содержать примерно 1 х 103 клеток / мл.

Нанесение разведений:
Если вы ожидаете, что все клетки вырастут, вы будете вносить только последнее разведение, так как другие трубки будут слишком концентрированными, и пластины, сделанные из них, будут содержат слишком много колоний для подсчета.Однако в радиационных экспериментах вы будете используйте разведения, содержащие больше клеток, чтобы компенсировать уменьшенное количество клеток которые переживают облучение. Таким образом вы получите оптимальное количество колоний для считайте на каждой пластине, даже если большинство клеток мертво.

е. У вас будут лучшие данные, если вы сделаете все посевы в двух или трех экземплярах. Первый Пометьте пластины маркером (Pilot SC-UF или Sharpie).(Вы будете также используйте эту же ручку для маркировки колоний при подсчете их.) Мы рекомендуем вам идентифицировать каждую пластину с номером деформации, доза (для радиационных экспериментов), табличка с разведением и ваши инициалы, но вы может предпочесть закодировать эту информацию в своих заметках и поставить кодовые буквы или цифры на табличке. Пишите только на крышке или маленькими буквами по краю дно, оставляя дно чистым для маркировки колоний, когда вы посчитай их.

f. Ресуспендируйте клетки в каждой пробирке, ударив по ней перед взятием образца, затем нанесите пипеткой 0,1 мл в центр каждой из дублирующих планшетов. Если вы используете раскладчики скрепок извлекают из конверта стерильный раскладчик. Если ты с помощью разбрасывателя стекла вынуть его из спирта, поджечь на пламени и после пламя горит, дотроньтесь им до агара одной из пластин подальше от клетки.Распределите клетки по поверхности любым распределителем, стараясь держите клетки на расстоянии не менее 0,5 см от края агара. (Если вы используете Пипеткой для метода посева перелейте 0,1 мл суспензии в 0,9 мл стерильной воды. Смешайте клетки с водой. Вылейте всю смесь на агар. поверхность, затем наклоните и поверните тарелку, пока смесь не распределится равномерно по поверхности. поверхность агара.)

О.Микроскопическое исследование дрожжей

Самый простой способ исследовать дрожжи под микроскопом — смотреть на них прямо на пластина. Это работает только с маломощными объективами (10x), потому что более мощные тоже близко к агару и затуманивается. Чтобы увидеть больше деталей, сделайте слайд с мокрым креплением. Нанеси каплю воды предметное стекло микроскопа. С помощью стерильной зубочистки перенесите небольшое количество дрожжей в воду и перемешайте. маленький. Затем накройте дрожжевую суспензию на предметном стекле покровным стеклом.Если подготовка должна быть при просмотре нескольких студентов, приклейте покровное стекло к слайду с помощью лака для ногтей и слайда. будут доступны для просмотра в течение нескольких часов. Погружение в масло не должно быть обязательным и просто соблюдая форму клеток, окрашивать их не нужно. При использовании подходящих методов окрашивания ядро можно увидеть, но хромосомы дрожжей слишком малы, чтобы их можно было увидеть при большом количестве света микроскопы.

Для демонстрации в классе вы можете использовать видеомикроскоп.Есть ряд очень хорошие видеомикроскопы, доступные на рынке. Если у вас его нет, можно получить многие из тех же результатов с классным микроскопом и домашней видеокамерой. Когда мы смотрим через микроскоп наши глаза фокусируются на бесконечности. Если разместить видеокамеру рядом с окуляр микроскопа и установите фокус камеры на бесконечность, он «увидит» то же, что и наш глаза. Это помогает исключить попадание света сбоку, обернув объектив камеры и окуляр микроскопа с куском темной ткани или алюминиевой фольгой.

П. дрожжевые штаммы

В экспериментах используются следующие штаммы:

Гаплоиды:

В. Облучение дрожжей ультрафиолетом Радиация

Стандартные бактерицидные УФ-лампы с разрядом паров ртути низкого давления. Пробирки являются идеальным источником ультрафиолета для облучения дрожжей дикого типа нормальными ферментами репарации ДНК.Солнечные или кварцевые галогенные фонари являются хорошими источниками ультрафиолета для облучения мутантных штаммов дрожжи с дефицитом нормальных ферментов репарации ДНК.

Стандартные бактерицидные лампы УФ-С представляют собой обычные люминесцентные лампы без люминесцентной лампы. покрытие и оболочка, прозрачная для ультрафиолета. Ртуть низкого давления Спектр представляет собой линейчатый спектр с наиболее заметной линией, имеющей длину волны 253,7 нанометры. К счастью, это близко к 260 нанометрам, оптимальным для поглощения ДНК.

Дизайн У.В. Радиационная камера продиктована несколькими соображениями, наиболее важным является безопасность. (См. Инструкции по созданию камеры УФ-излучения ) Излучение бактерицидных ламп вызывает болезненные и опасные ожоги глаз и кожи. поэтому они должны быть эффективно защищены. Воздействие на клетки невозможно контролировать, поворачивая лампа включается и выключается, потому что выходная сила лампы сильно зависит от температуры.Следовательно, он должен быть заключен в экранированный ящик с механизмом заслонки, чтобы он мог нагреваться до постоянная температура перед использованием. Дверь и ставни должны быть заблокированы, чтобы они не могут быть открыты одновременно.

Порядок работы камеры УФ-излучения:

1. Подключите лампу и включите ее. Вы можете с уверенностью сказать, когда лампа на, увидев световой индикатор.
2. Если возможно, дайте лампе нагреться в течение 30 минут.
3. Отцентрируйте чашку Петри по метке на дне чашки. ящик, снимите крышку пластины, осторожно опустите дверцу и откройте заслонку. Измерьте время экспозиции с момента открытия затвора. Когда время истекло, закройте ставни, аккуратно поднимите дверцу, наденьте крышку чашку Петри и удалите ее. Слишком быстрое перемещение двери вызывает воздух турбулентность, которая может вызвать загрязнение чашек с агаром.Если коробка оснащена лампой UV-B, аналогичная процедура может быть последовал.

Порядок экспонирования с использованием солнечных лучей или кварцевых галогенных фонарей:

1. Накройте посуду темной бумагой и, пока она остается накрытой, блюдо под углом 90 градусов к источнику света. Если вы используете кварцевый галогенный свет снимите стеклянную крышку с светильника. В то время как солнце и уличный свет производят меньше УФ-излучения, чем бактерицидные трубки следует принимать разумные меры предосторожности.Не смотри прямо у источника и избегайте любого длительного прямого контакта с кожей.

ВНИМАНИЕ! Кварцевая галогенная лампа очень сильно нагревается. Использование этой лампы должно быть под прямым присмотр учителя.

2. Снимите темную крышку с пластины и начните измерять время воздействия. По истечении времени накройте блюдо и переместите его. в инкубатор. Обычно нет необходимости снимать крышку с пластиковые чашки Петри при использовании солнечных или кварцевых галогенных ламп как источник ультрафиолета.Большинство пластиковых чашек Петри прозрачны для длины волн УФ-излучения, создаваемого этими источниками. Вы можете захотеть бежать пробный эксперимент на каждой новой партии чашек Петри. Если вы получаете уровень выживаемости выше, чем вы ожидаете, возможно, вы захотите удалить крышки при УФ-облучении. Если загрязнение становится проблемой, вы можете хотите накрыть посуду тонкой полиэтиленовой пленкой или пакетом для бутербродов.